Question

下图表示利用生物技术获得转基因猪和转基因烟草的过程(图中数字表示过程或技术，字母表示物质或结构)。请回答下列问题：

(1)为分离、提纯苏云金芽孢杆菌，先用________培养基进行扩大培养，再用________法进行分离，获得一个个单独的________________。

(2)研究过程中，采用________技术对目的基因进行扩增，然后将目的基因与质粒等载体结合形成了重组质粒。在重组质粒的构建过程中需要的工具酶有___________________________________。

(3)图中②代表________技术。培养C中的ES细胞时，一般要在培养皿底部制备一层胚胎成纤维细胞，目的是________________________________________________________________。

(4)若在0.5～0.6 mol/L的________溶液中用特定的酶处理D，可获得原生质体。若将含有D的培养物放在摇床上，通过______________培养可以分散成单细胞，这些单细胞具有________细胞的特征。

(5)使用自然生长的烟草茎进行组织培养，需要依次在70%酒精和________溶液中浸泡消毒。各种器皿和培养基等通常用________________法灭菌。

(6)从经特定免疫处理的猪中提取B淋巴细胞，与______________________________________

融合，形成杂交细胞，经筛选、克隆化培养后，获得的单一细胞特征是_____________________。

Answer

LB液体 划线分离(涂布分离) 菌落 PCR(聚合酶链式反应) 限制性核酸内切酶和DNA连接酶 胚胎体外培养 促进ES细胞生长、抑制其分化 甘露醇 液体悬浮 胚性 5%次氯酸钠 高压蒸汽灭菌 骨髓瘤细胞 既能产生特异性抗体，又能无限增殖

【解析】分析题图：图示为利用生物技术获得生物新品种的过程，其中①表示获取目的基因的过程，则A为目的基因，B为重组DNA分子；②表示早期胚胎培养技术；③表示胚胎移植；④⑤表示植物组织培养过程，D表示愈伤组织，E表示胚状体。

（1）苏云金芽孢杆菌可用LB液体培养基进行扩大培养；分离微生物常用平板划线法或稀释涂布平板法，这样可以获得一个个单独的菌落。

（2）PCR（聚合酶链式反应）技术可在体外大量扩增目的基因；构建基因表达载体时，首先需要用同种限制酶切割运载体和含有目的基因的外源DNA分子，其次需要用DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组质粒。

（3）图中②代表胚胎体外培养技术。若培养C中的ES细胞，一般在培养皿底部制备一层胚胎成纤维细胞，目的是促进生长抑制分化。

（4）若在0.5-0.6mol/L的甘露醇溶液环境下用特定的酶（纤维素酶和果胶酶）处理D，可获得原生质体。若将含有D的培养物放在摇床上，通过液体悬浮培养可以分散成单细胞，这些单细胞具有胚性细胞的特征。

（5）使用自然生长的烟草茎进行组织培养，需要依次在70%酒精和5%次氯酸钠溶液中浸泡消毒。各种器皿和培养基等通常用高压蒸汽灭菌法灭菌。

（6）制备单克隆抗体时，将浆细胞与骨髓瘤融合，经筛选，克隆培养后，获得既能产生特异抗体，又能无限增殖的杂交瘤细胞。

【点睛】本图结合图解，综合考查基因工程、细胞工程、胚胎工程及微生物的相关知识，解题关键能正确掌握相关工程技术的原理、操作步骤及应用，特别要注意分离微生物的两种方法的区别。