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下表是几种限制酶识别序列及其切割位点,图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点,其...

下表是几种限制酶识别序列及其切割位点,图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点,其中切割位点相同的酶不重复标注。请回答下列问题:

限制酶

BamHⅠ

Bcl

Sau3AⅠ

HindⅢ

识别序

列及切

割位点

 

(1)用图中质粒和目的基因构建重组质粒,应选用________两种限制酶切割,酶切后的载体和目的基因片段,通过________酶作用后获得重组质粒。为了扩增重组质粒,需将其转入处于________态的大肠杆菌。

(2)为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌,应在筛选平板培养基中添加________,平板上长出的菌落,常用PCR鉴定,所用的引物组成为图2中______________

(3)若BamHⅠ酶切的DNA末端与BclⅠ酶切的DNA末端连接,连接部位的6个碱基对序列为_______,对于该部位,这两种酶________(填“都能”“都不能”或“只有一种能”)切开。

(4)若用Sau3AⅠ切图1质粒最多可能获得________种大小不同的DNA片段。

 

(1)BclI和HindⅢ 连接 感受 (2)四环素 引物甲和引物丙 (3)都不能 (4)7 【解析】(1)选择的限制酶在目的基因的两侧都应该有切割位点,又因为用BamHⅠ酶会将两个标记基因都破坏,所以构建基因表达载体时只能选择BclI和HindⅢ对质粒和目的基因进行切割,漏出两种不同的粘性末端,再利用DNA连接酶将两者定向连接。再将重组质粒导入感受态的大肠杆菌进行扩增。 (2)由于构建重组质粒的时候,氨苄青霉素抗性基因被破坏,而四环素的抗性基因没有被破坏,所以为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌,应在筛选平板培养基中添加四环素。根据图2可知对目的基因进行扩增时的引物应该是引物甲和引物丙。 (3)根据表格中碱基分析,若BamH I酶切的DNA末端与Bcl I酶切的DNA末端连接,连接部位的6个碱基对序列为,对于该部位,这两种酶都不能切开。 (4)根据表格分析可知Sau3A I可以切割BclI和BamHⅠ的切割位点,所以若用Sau3A I切图1质粒最多可能获得7种大小不同的DNA片段。 【考点定位】基因工程的原理及技术  
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某科研团队利用植物细胞工程技术,把基因序列已知的抗除草剂(Bar)基因导入原生质体获得抗除草剂大豆。请回答下列相关问题:

(1)对于已获得的Bar基因可以用______________技术进行扩增。图中的a过程通常使用相同的____________酶和DNA连接酶,使目的基因与载体连接形成重组DNA。

(2)在b过程中,获得原生质体除了需要纤维素酶和果胶酶,还需要用到的试剂是__________________________

(3)成功导入重组DNA的原生质体经脱分化形成I__________,进而生长发育成植株。下列不属于I细胞应具有的特征是__________

A.薄壁细胞  B.细胞质丰富    C.液泡小  D.细胞核小

(4)若要判断转基因抗除草剂大豆是否成功,比较简便的检测方法是_____________________

 

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2016年4月27日,抚州市中心城区创建国家卫生城市工作正式启动,力争在2017年成功创建国家卫生城市。 “卫生城市”是一个城市综合功能和文明程度的重要标志。某同学欲利用所学习的微生物培养知识,通过实验证明痰液中含有细菌,来倡导同学们不要随地吐痰,为 “创卫”添一份力。请回答下列问题:

(1)欲培养细菌必须先制备可供细菌生长的培养基。实验室中常用牛肉膏蛋白胨固体培养基来培养微生物,该培养基的组成成分包括牛肉膏、蛋白胨、NaCl、______、H2O等;该培养基中微生物所需的氮源来自_________,制备该培养基的步骤是:计算-称量-溶化-灭菌-倒平板,其中灭菌常用的方法是________;培养基灭菌后,需要冷却到____℃左右才能倒平板,等平板冷凝后,还需要将平板倒置,主要目的是_________________

(2)为了使实验更有说服力,某同学设置空白对照组和若干实验组,其中对照组的作用是________ 。若在某次调查中,某一实验组平板上的平均菌落数为39个,而空白对照组的平板上出现T9个菌落,这种结果说明在此次调查中出现了_____现象。

(3)某同学利用稀释涂布平板法来统计样品中细菌的数目,统计结果往往比实际细菌的数目要低,主要原因是________________________________________

 

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下图为DNA的粗提取与鉴定的实验流程过程,请据图回答下列问题:

(1)本实验材料选用鸡血细胞液,不适合用哺乳动物的血细胞液,原因是_________________

(2)通过图B所示步骤取得滤液后,再向滤液中加入2mol/L的NaCl溶液的目的是________________

(3)图C所示加入蒸馏水的目的是_______________

(4)为鉴定实验所得丝状物的主要成分是DNA,可用_______试剂进行检验,在沸水浴条件下,冷却后可以看到颜色反应为____色。

 

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[生物——选修1:生物技术实践]图是某同学设计的茉莉油提取实验。左边是流程,右边是提取的实验装置,请回答:

(1)该同学提取茉莉油的方法是_______。采摘原料应在茉莉油含量较高的________(填“花开的盛期”或“花开的晚期”)采收。

(2)图中B过程表示_____,通常应向油水混合物中加入_____促进B过程的进行。要完成图中C过程需要向提取液中加入_____,因为通过B过程获得的提取物可能含有_______

(3)蒸馏完毕,应先____________,然后停止__________,最后拆卸蒸馏装置,拆卸顺序与安装顺序相反。

(4)橘皮精油主要储藏在橘皮部分,提取一般不采用图中所示的方法,原因是_______ 。为了防止橘皮压榨时滑脱,提高出油率,需要将柑橘皮干燥去水,然后用一种化学物质浸泡,使橘皮变得粗糙,细胞变得疏松,该化学物质是______________

 

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胡萝卜素可以用来治疗因缺乏维生素A而引起的各种疾病,可以作为食用色素。最近还发现天然胡萝卜素具有使描变细胞恢复为正常细胞的作用。请回答下列问题:

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(2)培养产胡萝卜素的酵母菌时,在温度及气体环境分别为________________条件下最适合其生长、繁殖。

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