Question

将PVY病毒外壳蛋白基因(PVY-CP)导入马铃薯，并使之表达即可获得抗PVY病毒马铃薯。图示是获得抗病毒马铃薯的部分操作，PVY-CP可以从质粒A中获取；质粒B是选用的运载体，另已知部分限制酶识别序列和切割位点：

请结合图像，运用所学知识回答问题：

(1)含有PVY-CP的质粒A保存在某细菌群体中，各个细菌含有相关不同的基因，这样的细菌群体称为_____________。

(2)关于步骤②中Ⅺenow酶的猜测，合理的是_____________。

A．催化合成的片段起引物作用

B．可以将DNA片段的粘性末端变成平末端

C．能催化DNA链的合成

D．与DNA连接酶的功能相同

(3)步骤④中应该使用的限制酶是________。

(4)利用基因工程将目的基因导入植物细胞，目前采用最多的方法是        。该方法首先需要将质粒C导入________中，进而转化马铃薯薯片，然后通过________技术获得抗PVY病毒马铃薯苗。

Answer

（1）基因文库 （部分基因组文库、基因组文库给分） （2）BC （3）BamHⅠ、SmaⅠ(仅答出一种酶给1分) （4）农杆菌转化法 农杆菌 植物组织培养

【解析】（1）将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入受体菌群体储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，为基因文库。（2）据图分析，该过程表示PCR技术，该DNA片段是要获得PVY-CP，A错。Klenow酶将DNA的粘性末端变成平末端，需要合成新DNA片段与之配对，B、C正确。没有起到连接DNA片段的作用，D错。（3）据表格分析，质粒B用BamHⅠ和SmaⅠ切割后，刚好一端为平末端，与步骤③DNA的平末端互补。另一端粘性末端，与步骤③DNA的粘性末端互补，再用DNA连接酶连接为重组质粒。（4）利用农杆菌转化法进行转化，首先需要将质粒C导入农杆菌，进而转化马铃薯，然后通过植物组织培养植物组织培养。

【考点定位】基因工程

【名师点睛】基因工程中应注意的问题：

(1)目的基因的插入位点不是随意的

基因表达需要启动子与终止子的调控，所以目的基因应插入启动子与终止子之间的部位。

(2)基因工程操作过程中只有第三步(将目的基因导入受体细胞)没有碱基互补配对现象

第一步存在逆转录法获得DNA，第二步存在黏性末端连接现象，第四步检测存在分子水平杂交方法。

(3)农杆菌转化法原理：农杆菌易感染植物细胞，并将其Ti质粒上的T－DNA转移并整合到受体细胞染色体DNA上。