Question

Ⅰ．转基因克隆猪已在我国培育成功。研究组首先从猪胚胎皮肤细胞中分离出纤维细胞，进行体外培养。通过电穿孔的方法将构建好的基因表达载体转入纤维细胞，经筛选后将转基因纤维细胞进行体细胞克隆，再将重组胚胎移入代孕母猪子宫内，最终获得转基因克隆猪。请回答：

（1）在对猪纤维细胞进行培养时，需要在细胞培养液中添加一定量的            ，以防止培养过程的污染。此外，应定期更换培养液，防止              对细胞自身造成危害。

（2）筛选转基因细胞时，需要用到基因表达载体中的                。

（3）在进行体细胞克隆前，先要从屠宰场收集猪卵巢，采集             ，并在体外培养成熟。然后将转基因纤维细胞核注入           中，再经过一系列过程获得含有目的基因的重组胚胎。

（4）为了提高重组胚胎的利用率，可对处于           阶段的胚胎进行均等分割，再将重组胚胎移入代孕母猪子宫中继续发育成转基因克隆猪。一般地，代孕母猪需要用激素处理处理，促使其           以利于受孕。

Ⅱ．土壤中有些细菌含有脲酶，可通过降解尿素作为其生长的氮源。现对土壤中的这类细菌进行分离实验，请回答：

（1）分离培养细菌时必须进行无菌操作，包括培养基和各种器皿都必须是无菌的，常用的灭菌方法有

              （至少答2种）。

（2）可用                法分离纯化得到能降解尿素的菌种。在接种活菌的过程中，要在          旁进行操作，接种后的培养皿            于37℃的            中培养。

（3）用含有酚红指示剂的培养基筛选能分泌脲酶的细菌，若培养基中存在分解尿素的细菌，其菌落周围会出现红色环带，这是由于尿素被分解产生的            使PH升高，使酚红指示剂产生颜色变化，从而证明这一菌株以尿素为氮源。变色区域越大，表明该菌株利用尿素的能力                 。

Answer

Ⅰ（1）抗生素；细胞代谢产物积累

（2）标记基因

（3）卵母细胞；去核卵细胞

（4）桑椹胚或囊胚；同期发情

Ⅱ（1）高压蒸气灭菌、灼烧灭菌（或干热灭菌）

（2）涂布分离 或划线分离；酒精灯；倒置；恒温培养箱；

（3）氨；越强

【解析】

试题分析：

Ⅰ（1）为了防止杂菌污染，在动物培养基中需要加入抗生素。培养过程中还应定期更换培养液，以防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害。

（2）基因表达载体中的标记基因的作用是筛选含有目的基因的受体细胞。

（3）在进行体细胞克隆前，先要从屠宰场收集猪卵巢，采集卵母细胞，并在体外培养到减数第二次分裂中期，然后将转基因纤维细胞核注入去核的卵细胞中，再经过一系列过程获得含有目的基因的重组胚胎。

（4）胚胎分割技术中一般将培养到桑椹胚或囊胚的胚胎进行均等分割。在胚胎移植过程中，代孕母猪需要用激素处理处理，促使其同期发情以利于受孕。

Ⅱ（1）微生物分离和培养过程中，培养基和培养皿常用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。

（2）菌种纯化可以用稀释涂布平板法或平板划线法进行接种，接种时注意在酒精灯旁进行，因为酒精灯附近杂菌比较少；接种后将培养皿倒置，放在37℃的恒温培养箱中培养。

（3）分泌脲酶的细菌能将尿素分解产生碱性物质氨，使得PH上升，与酚红指示剂产生颜色变化，所以其菌落周围会出现红色环带，此带月大，表明该菌株利用尿素的能力越强。

考点：本题考查胚胎工程、微生物的分离和培养的相关知识，意在考查考生理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力。