Question

民间传统酒曲中含有大量的微生物，现进行下述实验分离酒曲中的主要微生物。

实验一：将酒曲制成悬液后，分别取不同稀释度的酒曲悬液接种到GPDA培养基上，经培养后根据每个平板的菌落特征，统计不同微生物的菌落数，发现酒曲中主要有两类微生物，即酵母菌和霉菌。

（1）上述操作过程中的接种方法是______________。

（2）根据菌落特征鉴别微生物时，能够观察的菌落特征有_____________（多选）。

A．形状       B．颜色       C．隆起程度       D．大小

实验二：在液体中，酵母菌比霉菌生长快；而酸性培养基中酵母菌比细菌生长更适宜。下述方案将酵母菌从酒曲中进行了分离。用小刀切开曲块，挖取米粒大小一块投入酸性蔗糖豆芽汁培养液中，然后置于25℃培养箱中培养两天。

（1）酸性蔗糖豆芽汁培养液的成分包括黄豆芽、蔗糖、乳酸和水，其中碳源物质主要是___

（2）上述实验操作中，需要灭菌的有_______________________。

实验三：取浑浊的培养液1mL转接到另一瓶酸性蔗糖豆芽汁培养液中并培养，如此重复多次。多次转接后，取稀释液用图所示方法接种在蔗糖豆芽汁平板上。

（1）图中所用接种方法是____________________。

（2）与酸性蔗糖豆芽汁培养液成分相比，蔗糖豆芽汁平板培养基中少了乳酸，多了琼脂。这种成分改变的原因是：_________________________________________________________

Answer

稀释涂布平板法 ABCD 蔗糖、乳酸（黄豆芽） 小刀、培养液 平板划线法 利用酵母菌在酸性液体培养基中的生长优势，通过多次转接，已筛选出酵母菌，因此不必再用酸性培养液；此时通过平板划线法要分离酵母菌，此操作要在固体培养基上进行，因此需加琼脂

【解析】

纯化菌种时常采用稀释涂布平板法和平板划线法得到单菌落。菌落是指由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体。不同菌体形成的菌落特征不同，菌落特征包括：①菌落的形状、②菌落的大小、④隆起程度、⑤菌落颜色等。

实验一：

（1）根据“将酒曲制成悬液后，分别取不同稀释度的酒曲悬液接种到GPDA培养基上”说明上述微生物的接种方法为稀释涂布平板法。

（2）不同菌体形成的菌落特征不同，根据上述分析可知，菌落特征包括菌落的形状、大小、隆起程度和颜色等方面，故ABCD均符合题意。

实验二：

（1）酵母菌属于异养微生物，所需要的碳源是有机碳，碳源同时也是酵母菌的能源物质，酸性蔗糖豆芽汁培养液中的黄豆芽、蔗糖、乳酸和水中能为酵母菌提供碳源的有蔗糖、乳酸（黄豆芽）。

（2）实验过程中所使用的小刀、培养液均需要经过灭菌，以防止杂菌污染。

实验三：

（1）图中平板上是连续划线，所以使用的接种方法为平板划线法。

（2）由于利用酵母菌在酸性液体培养基中的生长优势，通过多次转接，已筛选出酵母菌，因此不必再用酸性培养液；此时通过平板划线法要分离酵母菌，此操作要在固体培养基上进行，因此加琼脂，与酸性蔗糖豆芽汁培养液成分相比，蔗糖豆芽汁平板培养基中少了乳酸，多了琼脂。