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动物器官的体外培养技术对于研究器官的生理、病理过程及其机制意义重大。下图一个新小鼠的肝脏小块培养装置示意图。请回答下列问题。

(1)肝脏切成小薄片,这有利于肝脏细胞                                   

(2)气室中充入5% C02气体的主要作用是                         

(3)培养液中添加抗生素是为了抑制细菌生长,但要注意选择抗生素的             ,以保证抗生素对肝脏无害。

(4)有机物X有毒性,可诱发染色体断裂。利用上图所示装置和提供的下列材料用具,探究肝脏小块对有机物X是否具有解毒作用。

材料用具:肝脏小块,外周血淋巴细胞,淋巴细胞培养液,植物凝集素(刺激淋巴细胞分裂);显微镜,载玻片,盖玻片,玻璃皿,滴管;吉姆萨染液(使染色体着色),有机物X溶液等。

验过程:

在淋巴细胞培养液中加入植物凝集素培养淋巴细胞,取4等份,备用。

利用甲、乙、丙、丁4组上图所示装置,按下表步骤操作(“”表示已完成的步骤)。

 

步骤一:加人肝脏培养液

步骤二:加入有机物X溶液

 

 

步骤三:放置肝脏小块

 

 

 

上表中还需进行的操作是                                     

培养一段时间后,取4组装置中的等量培养液,分别添加到4份备用的淋巴细胞培养液中继续培养。

④一段时间后取淋巴细胞分别染色、制片。在显微镜下观察                      ,并对比分析。若丙组淋巴细胞出现异常,而甲组的淋巴细胞正常,则说明                 

 

(1)1吸收氧气和营养物质、排出代谢废物 (2)维持培养液的pH (3)种类和剂量 (4)向乙(或丁)组装置中放置肝脏小块 染色体形态和数量 肝脏小块对有机物X具有解毒作用 【解析】(1)把肝脏切成小薄片,有利于肝脏细胞的呼吸代谢,即吸收氧气和营养物质、排出代谢废物. (2)气室中充入5% CO2的作用是形成碳酸来维持培养液适宜的pH. (3)同时也要注意选择抗生素的种类和剂量来抑制细菌生长. (4)乙组和丁组没有做处理,向乙(或丁)组装置中放置肝脏小块作为对照实验,有机物X有毒性,可诱发染色体断裂,所以要观察淋巴细胞的染色体形态和数量是否变化.甲组添加肝脏小块,淋巴细胞染色体正常,丙组没有添加,出现染色体异常,说明肝脏小块对有机物X具有解毒作用. 【考点定位】动物细胞与组织培养过程 【名师点睛】本题考查动物细胞培养的相关知识. 动物细胞培养的基本过程:取动物胚胎或幼龄动物器官、组织.将材料剪碎,并用胰蛋白酶(或用胶原蛋白酶)处理(消化),形成分散的单个细胞,将处理后的细胞移入培养基中配成一定浓度的细胞悬浮液.悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,成为细胞贴壁.当贴壁细胞分裂生长到互相接触时,细胞就会停止分裂增殖,出现接触抑制.此时需要将出现接触抑制的细胞重新使用胰蛋白酶处理.再配成一定浓度的细胞悬浮液.另外,原代培养就是从机体取出后立即进行的细胞、组织培养.当细胞从动植物中生长迁移出来,形成生长晕并增大以后,科学家接着进行传代培养,即将原代培养细胞分成若干份,接种到若干份培养基中,使其继续生长、增殖.通过一定的选择或纯化方法,从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞称为细胞株.当培养超过50代时,大多数的细胞已经衰老死亡,但仍有部分细胞发生了遗传物质的改变出现了无限传代的特性,即癌变.此时的细胞被称为细胞系.  
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考点分析:
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下图是单克隆抗体制备流程阶段示意图。

(1)                 技术和              技术是获得单克隆抗体的基础。

(2)图中A过程是从小鼠的脾脏中取得         细胞,该细胞能够产生          。从小鼠体内提取分离该细胞之前,应给小鼠注射        类物质。

(3)单克隆抗体与常规的血清抗体相比。最大的优越性是                         

(4)制备过程中,第二次筛选的目的是                                

(5)杂交瘤细胞体外培养过程中,为避免毒害,常采取的措施是                     

(6)如果破坏杂交瘤细胞中的核仁,抗体合成将不能进行,因该结构与        的形成有关。

 

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在20世纪初,科学家用植物细胞杂交方法,将白菜的原生质体和甘蓝的原生质体融合,成功地培育出了“白菜﹣甘蓝”杂种植株,据图回答下列问题:

(1)过程b完成的标志是__________。要促进杂种细胞的分裂生长,培养基中应有营养物质和激素,其中激素包括__________两类植物激素。

(2)在利用杂种细胞培育成为杂种植株的过程中,依据的原理是_________,c涉及的分裂方式为___________________

(3)若白菜细胞内有m条染色体,甘蓝细胞含n条染色体,则“白菜﹣甘蓝”细胞内含____条染色体;若杂种细胞培育成为“白菜﹣甘蓝”植株为四倍体,则此杂种植株的花粉经离体培育得到的植株属于几倍体植株?__________

(4)要制备“白菜﹣甘蓝”人工种子,要选取具有生根发芽能力的__________(结构),包裹上人工种皮制得。

 

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下图是植物细胞杂交过程示意图,请据图回答:

(1)植物体细胞杂交的第步是去掉细胞壁分离出有活力的原生质体。目前此步最常用的方法是           法,也就是在温和的条件下用           等分解植物的细胞壁。

(2)过程的发生必须进行人工诱导。人工诱导原生质体融合的原理是           ,常用的化学方法是用        试剂作为诱导剂诱导融合。动物细胞融合与植物生质体融合的基本原理相同,诱导融合的方法类似,动物细胞的融合还常用到                作为诱导剂。

(3)与过程③密切相关的具有单层膜结构的细胞器为             

(4)④过程称为                过程称为             若利用此技术生产治疗癌症的抗癌药物——紫杉醇,培养将进行到        (填字母编号)即可。

5)植物体细胞杂交在育种工作中具有广泛的应用价值,其突出的优点是可以         

 

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下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点,图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题:

(1)一个图1所示的质粒分子经Sma切割前后,分别含有_   __ ____个游离的磷酸基团。

(2)若对图中质粒进行改造,插入的Sma酶切位点越多,质粒的热稳定性越__________。

(3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒,不能使用Sma 切割的原因_______  _____。

(4)与只使用EcoR相比较,使用BamH和Hind 两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止___________________________________________________

(5)为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因,将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体,然后在_________________的培养基中培养,以完成目的基因表达的初步检测。

(6)基因工程中利用乳腺生物反应器生产-抗胰蛋白酶,应选用__________切割含有目的基因的DNA片段和载体,并用__________方法导入__________中,再利用SRY探针 (Y染色体上的性别决定基因)进行检测,将检测反应呈________(选填“阳”、“阴”)性的胚胎进行移植培养。

 

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为增加油菜种子的含油量,研究人员尝试将酶D基因与位于叶绿体膜上的转运肽基因相连,导入油菜细胞并获得了转基因油菜品种。

(1)研究人员依据基因的已知序列设计引物,采用       技术从陆地棉基因文库中获取酶

D基因,从拟南芥基因文库中获取转运肽基因,所含三种限制酶(ClaI、SacI、XbaI)的切

点如下图所示。则用                     酶处理两个基因后,可得到          端与

         端(填图中字母)相连的融合基因。

(2)将上述融合基因插入右上图所示Ti质粒的T-DNA中,构建               并导入农杆菌中。将获得的农杆菌接种在含          的固体培养基上培养得到含融合基因的单菌落,再利用液体培养基震荡培养,可以得到用于转化的侵染液。

(3)剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间,此过程的目的是                       

(4)进一步筛选后获得转基因油菜细胞,该细胞通过            技术,可培育成转基因油菜植株。用                法在分子水平上可检测转基因油菜植株中的融合基因是否成功表达。

 

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