Question

在生产研究上，常常需要进行微生物的培养和计数。回答下列与微生物的培养与利用有关的问题

（1）下图是利用______________法将微生物接种到固体培养基上，把混合的菌种逐步稀释分散获得______________菌落。接种后培养基应______________放在37℃恒温培养箱中进行培养。

（3）分析下面培养基的配方：NaNO₃、KH₂PO₄、NaH2PO4、MgSO₄•7H2O、KCl、H₂O。若此培养基用于筛选尿素分解菌，则应除去上述培养基成分中的________，并加入______________和________物质，以补充其生活所需的______________和________。培养基中加入酚红作指示剂的原因是尿素分解菌能合成________将尿素分解为氨，使培养基pH发生改变，酚红由黄变红，使菌落周围呈现红色。

（4）三位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中细菌数量。在对应稀释倍数为10⁶的培养基中，取0．2ml稀释液涂布，得到以下统计结果：

甲同学涂布了1个平板，统计的菌落数是260；

乙同学涂布了三个平板，统计的菌落数是210、240和246，取平均值232；

丙同学涂布了三个平板，统计的菌落数是21、212和256，取平均值163；

在三位同学的统计中，____________同学的统计结果是相对准确可信的。按照该同学的结果，每毫升原液中的菌体数是______________。用这种方法测得的菌体数比实际活菌数量______________。

（4）实验结束后，使用过的培养基应该进行_____________处理后，才能倒掉。

Answer

（1）平板划线法 单个 倒置

（2）NaNO3 尿素 葡萄糖 氮源 碳源 （要求：前后对应） 脲酶

（3）乙 1．16×109 少

（4） 灭菌

【解析】

（1）由图可知，其采取的是平板划线法，该方法能把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。接种后培养基应倒置放在37℃恒温培养箱中进行培养。

（2）培养分解尿素的细菌，其氮源是尿素，所以培养基中要除去含氮物质，即去除NaNO3，并加入尿素和葡萄糖，以提供氮源和碳源。尿素分解菌能合成脲酶将尿素分解为氨，使培养基pH发生改变，酚红由黄变红，使菌落周围呈现红色，所以培养基中要加入酚红作指示剂。

（3）甲同学只涂布了1个平板，实验数据说服力不够 丙同学其中一个平板的计数结果与另两个相差太远，说明操作过程出现错误，数据缺乏正确性，所以乙同学的统计结果是相对准确可信的。在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均值为23．4，那么每毫升样品（涂布平板时所用稀释液的体积为0．2mL） 中的菌落数是=106×23．2×1/0．2=1．16×109个。当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察的是一个菌落，因此用这种方法测定得密度偏低。

（4）实验结束后，使用过的培养基应该进行灭菌处理后，才能倒掉。

【考点定位】微生物的分离和培养、测定某种微生物的数量

【名师点睛】微生物接种的方法很多，最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法。若要对微生物进行取样计数，接种方法只能是稀释涂布平板法。稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养．培养基的营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。