Question

微生物培养技术在医疗、工业生产、食品生产等方面均有应用。下表是一种培养基的配方，请回答：

牛肉膏	蛋白胨	NaCl	琼脂	水
0．5g	1g	0．5g	2g	200ml

（1）此培养基中的蛋白胨主要为微生物提供                             。在各种成分溶化后分装前，必须进行的是                 和灭菌。

（2）临床使用抗生素前，有时需要进行细菌的耐药性试验，其大致过程是：将含有某种细菌的菌液用  法接种在培养基表面并进行培养，最终形成单个的菌落；再分别将含有等剂量不同种抗生素的相同大小的圆形滤纸片置于该平板上有菌落的位置，继续培养一段时间后，若滤纸片下的菌落死亡，说明该细菌对该抗生素             。（填“敏感”或“不敏感”）

（3）用上述方法统计菌落数目时，一般选择菌落在             的平板进行计数，在某一稀释度下平板上的平均菌落数为50个，所用稀释液的体积为0．2ml，稀释倍数为10⁵时，则每毫升样品中的菌落数为                     。在进行分离分解尿素的细菌实验时，A同学从培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。A同学的实验结果产生的原因可能有__________________（填序号）。

①由于土样不同 ②由于培养基污染 ③由于操作失误 ④没有设置对照

（4）在筛选纤维素分解菌的过程中，通常用__________________法，这种方法能够通过颜色反应直接对纤维素分解菌进行筛选。甲同学在实验时得到了如下图所示的结果，则纤维素分解菌位于            。

A．③   B．①②       C．②③       D．①②③

Answer

（1）碳源、氮源和生长因子 调节pH

（2）稀释涂布平板 敏感

（3）30-300 2．5×107 ①②③

（4）刚果红染色 A

【解析】

试题分析： ⑴此培养基中的蛋白胨主要为微生物提供碳源、氮源和生长因子。在各种成分溶化后分装前，应该先调节pH，然后灭菌，以防止杂菌污染培养基。

⑵分离纯化菌种，可采用稀释涂布平板法将菌液进行一系列梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基的表面进行培养；在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。将含有等剂量不同种抗生素的相同大小的圆形滤纸片置于该平板上有菌落的位置，继续培养一段时间后，若滤纸片下的菌落死亡，说明该细菌对该抗生素敏感。

⑶用稀释涂布平板法统计菌落数目时，为保证结果准确，一般选择菌落数在30-300的平板进行计数，在某一稀释度下平板上的平均菌落数为50个，所用稀释液的体积为0．2ml，稀释倍数为105时，则每毫升样品中的菌落数＝（50÷0．2）×105＝2．5×107。A同学与其他同学筛选的菌落数差异很大，可能的原因是：采集的土样不同、培养基灭菌不彻底而导致培养基被污染、或是实验过程中没有进行无菌操作，造成操作失误，即①②③。

⑷刚果红可与纤维素形成红色复合物，但并不和纤维素水解后的纤维二糖和葡萄糖发生颜色反应。当纤维素被纤维素酶水解后，刚果红—纤维素复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。据此可知：筛选纤维素分解菌，常用刚果红染色法，图示中的纤维素分解菌位于③，A项正确，B、C、D三项均错误。

考点：本题考查微生物的培养与应用的相关知识，意在考查考生理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，形成知识网络结构的能力。