Question

血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，负责血液中O₂或CO₂的运输。请根据血红蛋白的提取和分离流程图回答问题。

（1）洗涤红细胞的目的是__________，洗涤干净的标志是______________。

（2）图中A过程是_________，在此过程中起作用的是____________ 。操作时，应将烧杯置于_______充分搅拌，加速红细胞的破裂。

（3）透析的作用是_________，透析时用PH为7，物质的量浓度为20mmol/L的磷酸缓冲液的作用是___________。

（4）凝胶色谱法是根据_______________而分离蛋白质的方法。装填凝胶色谱柱时，色谱柱内不能有气泡存在，原因是____________________。

Answer

去除杂蛋白(血浆蛋白) 离心后的上清液不再呈现黄色 血红蛋白的释放 蒸馏水、甲苯 磁力搅拌器 去除样品中分子量较小的杂质 模拟生物体内的过程，（保持溶液的pH与体内环境基本一致）保证血红蛋白的结构和功能 相对分子质量的大小 气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果

【解析】

1、血红蛋白的提取与分离的实验步骤主要有：
（1）样品处理：①红细胞的洗涤，②血红蛋白的释放，③分离血红蛋白。
（2）粗分离：①分离血红蛋白溶液，②透析。
（3）纯化：调节缓冲液面→加入蛋白质样品→调节缓冲液面→洗脱→收集分装蛋白质。
（4）纯度鉴定--SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。
2、分析题图：A表示血红蛋白的释放，B表示样品的加入和洗脱。

（1）洗涤红细胞的目的是去除杂质蛋白。重复洗涤三次，直至上清液中没有黄色，表明红细胞已洗涤干净。

（2）样品处理过程为：红细胞的洗涤→血红蛋白的释放→分离血红蛋白溶液→透析，所以A表示血红蛋白的释放，红细胞置于清水中会吸水涨破，甲苯是表面活性剂的一种，可将细胞膜溶解，因此此过程中起作用的是蒸馏水、甲苯。操作时，应将烧杯置于磁力搅拌器充分搅拌，加速红细胞的破裂。

（3）在样品粗分离操作中，将收集的血红蛋白溶液放在透析袋中进行透析。透析的目的是去除分子量较小的杂质，其原理是透析袋能使小分子自由进出，而大分子则保留在袋内。磷酸缓冲液（pH为7.0）能够准确模拟生物体内的生理环境，保持体外的pH和体内的一致。

（4）凝胶色谱法的原理是分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢，因此凝胶色谱法的依据是：根据相对分子质量的大小分离蛋白质。在装填凝胶柱时，不得有气泡存在，气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。