Question

尿素是农业生产中常用的氮肥，尿素只有通过土壤中某些细菌分解为氨后，才能被植物吸收利用。分解尿素的细菌都能合成脲酶，脲酶能催化尿素分解。某同学要分离土壤中能分解尿素的细菌，并统计每克土壤样品中活菌数目，培养基配方如下：

KH2PO4	Na2HPO4	MgSO4•7H2O	蛋白胨	葡萄糖	尿素	琼脂
1．4 g	2．1g	0．2g	1．0g	10．0g	1．0g	15．0g

（1）根据培养基的成分判断，该同学能否分离出土壤中分解尿素的细菌_______（能/不能），原因是____________________________。

（2）要统计每克土壤样品中活菌数目，宜采用____________法接种。接种前，判断培养基是否被污染，常用的方法是__________。

（3）一同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，应当怎样操作才可避免此种现象。 ___________

（4）如果探究温度对脲酶活性的影响，可能对实验结果造成影响的无关变量有_________（至少答两项）。

Answer

不能 培养基含蛋白胨，尿素不是唯一的氮源 稀释涂布平板 将空白培养基在适宜条件下培养一段时间，观察有无菌落产生 对菌液进行梯度稀释（增大稀释倍数） 脲酶的量与浓度、反应时间、pH等

【解析】

1．选择培养基的概念是：在微生物学中，将允许特定微生物种类生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基，由于分解尿素的细菌都能合成脲酶，脲酶能催化尿素水解，因此在以尿素为唯一氮源的培养基上，分解尿素的菌能以尿素为氮源生长，而不能分解尿素的菌因缺乏氮源而无法生长。
2．常用的接种微生物的方法有稀释涂布平板法和平板划线法，稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液涂布到固体琼脂培养基上，进行培养，在稀释度足够高的菌液里，将聚集在一起的微生物分散成单个细胞，获得由单个细胞繁殖而来的菌落。

（1）由图中培养基的配方可知，该培养基中，能提供氮源的是蛋白胨和尿素，不能利用尿素的菌可以以蛋白胨为氮源生长，所以不能分离出分解尿素的菌。

（2）微生物常用的接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法，由于稀释涂布平板时，可以确定涂布的体积，因此要统计每克土壤样品中活菌数目，宜采用稀释涂布平板法进行接种。将空白培养基在适宜条件下培养一段时间，观察有无菌落产生，可以判断培养基是否被污染。

（3）培养基上的菌落连成一片，最可能,的原因是菌液没有梯度稀释，浓度过高。要避免此种现象需要对菌液进行梯度稀释。

（4）探究温度对脲酶活性的影响，可能对实验结果造成影响的无关变量有脲酶的量与浓度、反应时间、pH等。