Question

玉米A具有高产、抗病等优良性状，为使其获得抗除草剂性状，操作流程如下图，其中人为整合上去的报告基因可在筛选检测目的基因是否导入起作用。回答下列有关问题。

（1）通过______________或______________法可以扩増抗除草剂基因G。

（2）Ti质粒上的报告基因在农杆菌内不能获得相应的蛋白质产物，在受体植物细胞中则可以，可能的原因是__________________________________________。步骤①中为防止酶切产物自身环化，构建表达载体需用2种限制酶，选择的原则______________________。

①质粒内，每种限制酶只有一个切割位点

②酶切后，Ti质粒形成的两个黏性末端序列相同

③G基因编码蛋白质的序列中，每种限制酶只有一个切割位点

④酶切后，G基因形成的两个黏性末端序列不相同

A．①③      B．①④      C．②③      D．②④

（3）农杆菌感染愈伤组织时，T－DNA携带的G基因易转移到受体细胞______________上，然后除尽农杆菌，再使用含_____________________的培养基得到植株B。整个过程中影响玉米愈伤组织能否成功再生植株的原因除了环境因素和培养基的成分之外，还可能有_______________________________________________________（答出两点即可）。

（4）植物根瘤磨碎后，为使农杆菌的分离效果更好，采用______________法。若某一实验组平板上茵落平均数为38个／平板，而空白对照组的一个平板上出现了8个菌落，这种结果说明在此次分离出现了______________现象。若将30（即38－8）个／平板作为本组菌落数的平均值，该该做法_______（填“正确”或“不正确”）。

（5）上图操作流程的玉米幼胚到植株B的过程中，不同培养基的区别主要在于植物生长调节剂的浓度不同，过程④⑤分别选择______________、______________（填下表中的培养基类型甲或乙），写出表中“……＂处的信息____________________________。

Answer

PCR扩增农杆菌体内扩增报告基因转录后在农杆菌内无法加工，从而无法合成相应蛋白质B染色体除草剂玉米的基因型，愈伤组织继代培养的次数涂布杂菌污染不正确乙甲MS培养基、蔗糖、琼脂、水

【解析】

每种限制酶都有特定的切割位点，构建基因表达载体时可用同一种限制酶切割目的基因和运载体，用DNA连接酶链接，实际操作中通常可用两种限制酶切割目的基因两端，防止酶切产物自身环化；农杆菌易感染双子叶植物和裸子植物，对单子叶植物没有感染力，Ti质粒的T-DNA可转移至受体细胞，并整合到受体细胞的染色体上，转化时，目的基因插入Ti质粒的T-DNA上。影响愈伤组织能否成功再生植株的原因有：环境因素如光温、培养基成分如植物激素配比，以及不同种类植物或同种植物的不同基因型个体间存在遗传的差异，细胞全能性的表达程度大小不同，有些在多次继代培养后会丧失细胞全能性的表达能力。分离微生物时，涂布分离更易获得单菌落；植物组织培养过程中培养基为MS培养基，除了加入相关的植物生长调节剂，还需加入蔗糖、琼脂、水等；NAA是萘乙酸，BA是苄基腺嘌呤，植物组织培养中用到的培养基组成如MS发芽培养基：MS培养基+BA溶液（多）+ NAA溶液（少）+ 蔗糖 + 琼脂；MS生根培养基：MS培养基+NAA溶液+蔗糖+琼脂，因此甲是生根培养基，乙是发芽培养基，根据图示，④需要用发芽培养基，⑤为生根培养基。

（1）扩增抗除草剂基因可通过PCR扩增或农杆菌体内扩增实现。

（2）农杆菌是原核生物，受体植物细胞是真核生物，原核生物细胞缺乏真核生物的蛋白质加工系统,因此报告基因转录后在农杆菌内无法加工，从而无法合成相应蛋白质。步骤①中选择2种限制酶，目的是产生不同的黏性末端，防止酶切产物自身环化，因此①④符合，应选B。

（3）T－DNA携带的G基因易转移到受体细胞染色体上；植株B具有抗除草剂性状，因此需要在培养基中加入除草剂进行筛选；影响愈伤组织能否成功再生植株的原因除了环境因素和培养基的成分之外，还与玉米的基因型、愈伤组织继代培养的次数有关。

（4）采用涂布分离法分离农杆菌效果更好；若空白对照组的一个平板上出现了8个菌落，说明在此次分离出现了杂菌污染，因此将30（即38－8）个／平板作为本组菌落数的平均值的做法不正确。

（5）④应选发芽培养基，⑤为生根培养基，而甲是生根培养基，乙是发芽培养基，因此④⑤分别选择乙、甲；植物组织培养过程中除了加入相关的植物生长调节剂，还需加入MS培养基，蔗糖、琼脂、水等。