Question

回答下列（一）、（二）小题：

（一）自生固氮菌是一种能独立固定氮气的细菌，其中有些好氧种类能产生PHB（一种生物可降解的热塑性塑料）。现欲从活性污泥中分离、纯化、筛选出高产PHB的固氮菌，操作流程如下：采集土样→富集培养→分离、纯化培养→初步筛选PHB固氮菌→筛选高产PHB固氮菌→保存备用。请回答：

（1）富集培养时，为达到筛选自生固氮菌的目的，在配制培养液时不应添加___________。培养时要将装有培养液的锥形瓶放置在摇床上振荡培养，其目的是为细菌的生长提供。

（2）用于筛选高表达量菌株的方法之一是经涂布分离获得__________。进行分离、纯化培养时，要先将培养基倒入__________中，制成平板，此时所使用的培养基与富集培养时有所不同，添加了一定量的__________。

（3）在纯化过程中，在固体培养基上划线时，下列操作正确的是__________。

A.接种环采用70%酒精灭菌

B.接种时应在酒精灯火焰附近进行

C.划线时要将最后一区的划线与第一区的划线相连

D.划线分离时，需要把接种环深入到培养基中进行接种

（二）下图表示细胞融合技术的部分过程，请回答：

（1）若甲、乙细胞是植物细胞，在细胞融合时，首先需将___________消化除去。获得的丁细胞在植物组织培养是通过平衡___________配比进行调控，从而实现植物器官、组织的发生和形态建成。

（2）若该过程是制备癌胚抗原单克隆抗体的部分过程，实验中首先将___________注入小鼠体内，然后从产生免疫反应的小鼠脾脏中获取经免疫的___________细胞，将其与骨髓瘤细胞融合，筛选出___________细胞。

（3）若甲、乙细胞到丙细胞过程是哺乳动物体外受精过程，甲、乙细胞能够结合的基础是细胞膜表面有特异性___________功能的蛋白。若丁细胞为囊胚的外表扁平细胞，由其组成的结构称为___________。

Answer

含氮物质（氮源）充足的氧气 单菌落 培养皿 琼脂糖 B 细胞壁 植物激素 癌胚抗原 B淋巴 杂交瘤 识别 滋养层

【解析】由题干可知该题考查微生物的纯化和培养及细胞融合想知识，主要考察考生对知识点的识记、理解掌握程度。

一、（1）因为要分离固氮菌，所以可以选用不加氮源的培养基进行初步筛选。而培养时要将装有培养液的锥形瓶放置在摇床上振荡培养，其目的是为细菌的生长提供充足的氧气。

（2）用于筛选高表达量菌株的方法主要有平板划线法和稀释涂布平板法，都是为了获得单菌落，所以经涂布分离可以获得单菌落。制平板时需要将灭过菌的培养基倒入培养皿中进行凝固。此时所使用的培养基与富集培养时有所不同，添加了一定量的琼脂，因为富集培养基是液体，而此时的是固体，需要添加凝固剂琼脂。

（3）在纯化过程中，在固体培养基上划线时，一定要注意严格无菌条件，其中接种环采用灼烧灭菌，A错误。接种时应在酒精灯火焰附近进行，B正确。划线时最后一区的划线与第一区的划线不能相连，C错误。划线分离时，需要把接种环接触到培养基中进行接种，而不能深入到培养基中，D错误。

二、（1）若甲、乙细胞是植物细胞，在细胞融合时，首先需将具有保护作用的细胞壁用纤维素酶和果胶酶去掉，才能获得原生质体。获得的丁细胞即杂种植物细胞在植物组织培养是通过平衡植物激素（主要是生长素和细胞分裂素）配比进行调控，从而实现植物器官、组织的发生和形态建成。

（2）若该过程是制备癌胚抗原单克隆抗体的部分过程，实验中首先将抗原即癌胚抗原注入小鼠体内，然后从产生免疫反应的小鼠脾脏中获取经免疫的B淋巴细胞，将其与骨髓瘤细胞融合，筛选出既能产生特异性抗体还能大量增殖的杂交瘤细胞。

（3）若甲、乙细胞到丙细胞过程是哺乳动物体外受精过程，甲、乙细胞能够结合的基础是细胞膜表面有特异性识别功能的蛋白。若丁细胞为囊胚的外表扁平细胞，由其组成的结构称为滋养层细胞，内部是具有发育全能性的内细胞团。