Question

苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如图所示，①为土壤样品。请回答下列问题：

（1）②中培养目的菌株的选择培养基中应加入             作为碳源，②中不同浓度碳源的培养基  

     （A．影响；B．不影响）细菌的数量，如果要测定②中活细菌数量，常采用              法。

（2）④为对照，微生物在④中不生长，在⑤中生长，④与⑤培养基的主要区别在于            ；使用                 法可以在⑥上获得单菌落。采用固体平板培养细菌时为什么进行倒置培养？

（3）如何比较不同菌株降解苯酚能力的大小？

（4）实验过程中如何防止其它微生物的污染？

Answer

（1）苯酚 A 稀释涂布平板法

（2）④与⑤培养基的主要区别在于④的培养基没有加入苯酚作为碳源，⑤培养基的中加入苯酚作为碳源。使用释涂布平板法或平板划线法可以在（6）上获得单菌落。

采用固体平板培养细菌时要倒置培养，以防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基。

（3）5支洁净培养瓶→分别加入相同培养基（加等量的苯酚，用pH试纸检测这5支瓶内培养基的pH，用苯酚调试使之相等，苯酚是唯一的碳源）→分别接种5种等量的来自不同菌株的菌种→在相同的适宜条件下培养相同的时间→再用pH试纸检测这5支瓶内培养基的pH。

苯酚显酸性，不同菌株的菌种降解苯酚的能力不同，5支瓶内培养基中的苯酚被分解的量不同，所以pH不同。用pH试纸检测这5支瓶内培养基的pH，从而比较不同菌株降解苯酚能力的大小。

（4）从制备培养基到接种与培养等全部实验过程要无菌操作

【解析】（1）②中的选择培养基中应加入苯酚作为碳源，②中不同浓度的碳源A影响细菌数量，稀释涂布平板法来测定②中活菌数目。

（2）④与⑤培养基的主要区别在于④的培养基没有加入苯酚作为碳源，⑤培养基的中加入苯酚作为碳源。使用释涂布平板法或平板划线法可以在（6）上获得单菌落。采用固体平板培养细菌时要倒置培养，以防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基。

（3）5支洁净培养瓶→分别加入相同培养基（加等量的苯酚，用pH试纸检测这5支瓶内培养基的pH值，用苯酚调试使之相等，苯酚是唯一的碳源）→分别接种5种等量的来自不同菌株的菌种→在相同的适宜条件下培养相同时间→再用pH试纸检测这5支瓶内培养基的pH.   苯酚显酸性，不同菌株的菌种降解苯酚的能力不同，5支瓶内培养基中的苯酚被分解的量不同，所以pH值不同。用pH试纸检测这5支瓶内培养基的pH值，从而比较不同菌株降解苯酚能力的大小。