Question

中国经济的发展深刻地影响着农村生活，过去农村大多以农作物秸秆作为主要能源用于做饭、取暖等，现在基本上已经被电能、天然气等能源所取代，从而造成一些不必要的能源闲置及浪费。其实农作物秸秆是一种廉价易得的资源，有很大的利用价值，请回答下列相关问题：

（1）分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶至少由3种组分形成的复合酶，其中的葡萄糖苷酶可将__________________分解成____________________。

（2）从土壤中分离出分解纤维素的微生物的实验流程如下：

① 步骤（二）选择培养以_______________作为唯一碳源；

② 步骤（三）是__________________；

③ 步骤（五）的鉴别培养基需用___________染液，挑选菌落时应该挑选____________菌落。

（3）为了测定细菌含量，将稀释度为10⁴的菌液均按0.1mL的用量各接种3个平板，在适宜条件下培养至菌落数目稳定时才能计数，其原因是________________________________；3个平板上长出的菌落分别为42、40、38，则每升菌液的活菌数约为________个。

（4）计数时，通常以菌落数在30—300的稀释度来计算细菌含量，高于300由于稀释不够，可能由多个细菌重叠在一起形成一个菌落而引起实验结果偏小；也不选低于30的稀释度来计算细菌含量，其原因是_____________________________________________________。

Answer

纤维二糖 葡萄糖 纤维素 梯度稀释 刚果红 产生透明圈或有透明圈 防止因培养时间不足而漏记 4.0×109 细菌密度太低，细菌数极少，实验偶然误差大

【解析】试题分析：从土壤中分离微生物的实验流程如下：土壤取样→选择培养→梯度稀释→鉴别培养。在筛选纤维素分解菌的过程中，常用刚果红染色。稀释涂布平板法能用于微生物的计数，其计算公式为：1毫升（克）样品中的菌株数=（C÷V）×M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（毫升），M代表稀释倍数；用稀释涂布平板法对微生物计数往往比活菌的实际数目低，因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的是一个菌落。

（1）微生物产生的纤维素酶是一种复合酶，包括C1酶，Cx酶和葡萄糖苷酶，其中的葡萄糖苷酶可将纤维二糖分解成葡萄糖。

（2）①要从土壤中分离分解纤维素的微生物，应该用以纤维素作为唯一碳源的选择培养基。

②依据分离微生物的实验流程可知，步骤（三）应该是梯度稀释。

③步骤（五）的鉴别培养基中需要加入刚果红，可与培养基中的纤维素形成红色复合物，当纤维素被分解后，红色复合物不能形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，从而可筛选纤维素分解菌，因此挑选菌落时，应该挑选出现透明圈的菌落。

（3）在适宜条件下培养至菌落数目稳定时才能计数，其原因是防止因培养时间不足而漏记。

平板上平均菌落数=（42+40+38）÷3=40个，每毫升菌液的活菌数约=（C÷V）×M=（40÷0.1）×104=4×106个，每升菌液的活菌数约=4×106×103=4×109个。

（4）计数时，通常以菌落数在30—300的稀释度来计算细菌含量，不选低于30的稀释度来计算细菌含量，其原因是细菌密度太低，细菌数目极少，会导致实验偶然误差较大。

【点睛】解答第（2）题，要注意从土壤中分离出分解纤维素的培养基要求，选择培养基中只能加唯一的碳源-纤维素。