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下面是制备固定化酵母细胞的实验步骤,请回答: 活化酵母细胞→配制海藻酸钠溶液→海...

下面是制备固定化酵母细胞的实验步骤,请回答:

活化酵母细胞→配制海藻酸钠溶液→海藻酸钠溶液与酵母细胞混合→固定化酵母细胞。

(1)在________状态下,微生物处于休眠状态。活化就是让处于休眠状态的微生物重新恢复________状态。活化前应选择足够大的容器,因为酵母细胞活化时______________

(2)如果海藻酸钠溶液浓度过低,形成的凝胶珠所包埋的酵母细胞数目____________,影响实验效果。

(3)观察形成凝胶珠的颜色和形状,如果颜色过浅,说明_________________;如果形成的凝胶珠不是圆形或椭圆形,说明______________________________________________

(4)固定化细胞技术一般采用包埋法,原因是_______________________________

 

缺水 正常的生活 体积会增大 少 海藻酸钠溶液浓度偏低 海藻酸钠溶液浓度偏高,制作失败 细胞个大,不易从包埋材料中漏出 【解析】试题分析:活化是让处于休眠状态的微生物重新恢复正常的生活状态;凝胶珠的颜色和形状:如果制作的凝胶珠颜色过浅、呈白色,说明海藻酸钠的浓度偏低,固定的酵母细胞数目较少;如果形成的凝胶珠不是圆形或椭圆形,则说明海藻酸钠的浓度偏高,制作失败,需要再作尝试。刚形成的凝胶珠应在CaCl2溶液中浸泡一段时间,以便Ca2+与Na+充分交换,形成的凝胶珠稳定。 (1)酵母菌在缺水状态下处于休眠状态。活化加入水使得酵母菌恢复正常的生活状态,酵母细胞活化时体积会增大,则活化前应选择足够大的容器,以避免酵母菌溢出容器外。 (2)如果海藻酸钠浓度过低,形成的凝胶珠颜色过浅,所包埋的酵母细胞数目较少。 (3)观察形成的凝胶珠的颜色和形状,如果颜色过浅,说明固定化酵母细胞数目较少;如果形成的凝胶珠不是圆形或椭圆形,说明海藻酸钠浓度偏高,制作失败。 (4)细胞个大,不易从包埋材料中漏出,所以固定化细胞一般采用包埋法固定。  
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考点分析:
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大肠杆菌是人和动物肠道中普遍存在的一种兼性厌氧菌,在无氧条件下,大肠杆菌通过发酵能将葡萄糖转变为多种有机酸并产生CO2等气体。某研究机构使用“滤膜法”对受污染的河流水体进行了大肠杆菌活菌数目的测定。请回答下列问题:

(1)研究人员向培养大肠杆菌的葡萄糖蛋白胨培养液中加入适量的溴麝香草酚蓝水溶液,培养一段时间后,可观察到溶液颜色的变化为______________________。为了鉴别大肠杆菌菌落,可向培养基中加入__________作为指示剂。

(2)测定大肠杆菌活菌数目时,需制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,该培养基中为细菌提供氮源的物质是__________________

(3)为了便于统计污染严重的水体中活菌的数目,需将水样进行适当稀释,例如取水样1 mL加入无菌水________ mL制备稀释倍数为102的稀释液,并照此依次制备更高倍数的稀释液。每个稀释倍数的菌液取10 mL进行过滤,然后将滤膜放置在培养基上。为了防止杂菌污染,稀释、过滤和旋转滤膜等操作都应该在________附近进行。

(4)将放有滤膜的平板置于适宜条件下培养,每隔12 h统计一次菌落数目,应选取菌落数目________时的记录作为结果。如果经过培养后稀释倍数为102的4个平板上菌落数分别为43、47、42、48,那么每升河水中约含大肠杆菌________个。用这种方法测定的细菌数量比实际活菌数量要少,这是因为____________________________________________

 

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下面的图甲表示酵母菌、硝化细菌和乳酸菌在半固体培养基中的生长情况,图乙表示这三种菌的增殖速度与氧气浓度之间的关系,请据图回答:

(1)图乙中a、b、c三条曲线依次表示图甲________号试管中微生物在不同氧气浓度中的增殖速度。

(2)研究发现,青霉素能破坏细菌的细胞壁并在细菌细胞的繁殖期起杀菌作用。如果培养基中混杂了这三类微生物,请设计实验,利用改变培养基成分等培养条件,将酵母菌和硝化细菌分离出来。

①主要步骤:

A.分别配制不含________的培养基(A)和加入______的培养基(B),分别灭菌。

B.分别接种混合液放在适宜条件下培养。

C.观察结果。

②结果:在A培养基上生存的是________,在B培养基上生存的是________

(3)微生物培养过程中,获得纯净培养物的关键是__________________

 

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常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖来进行酒精发酵,而自然界中某些酵母菌能分解木糖产生酒精,但是对酒精的耐受能力差。科学家利用基因工程培育了能利用这两种糖进行发酵且对酒精耐受能力强的酿酒酵母。请分析回答:

(1)为了减少灭菌后器皿被污染,灭菌前应该将器皿__________________。下图是灭菌锅及其局部剖面示意图,图中甲、乙指示的结构依次是_____________________________________

(2)在制作牛肉膏蛋白胨培养基时,要求将称好的牛肉膏连同________一同放入烧杯,加入少量的水,加热。

(3)用高压灭菌锅灭菌后的培养基,需要冷却到____℃左右时,才能用来倒平板。你可以用________________________方法来估计培养基的温度。

(4)取从自然界中采集的葡萄,然后在超净台上将葡萄置于0.1%__________水溶液中进行表面消毒5 min,再用________将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中,然后进行纯化培养。下图甲是经上述纯化培养的结果,在培养基上接种时划线的顺序依次是__________(用编号表示)。研究者在经过甲接种后得到了一个经培养后菌落分布如图乙所示的平板,推测接种时可能的操作失误是__________________________________________

(5)下表为某学生在筛选培养能利用木糖发酵的酵母菌时所配制的培养基配方,请指出其中的明显不足之处________

K2HPO4

FeSO4

MgSO4·7H2O

NaNO3

0.1 g

0.001 g

0.05 g

0.3 g

KCl

蔗糖

木糖

琼脂

蒸馏水

0.05 g

3.0 g

3.0 g

2.0 g

100 mL

 

(6)在将目的基因连接到具有尿嘧啶合成酶基因作为标记基因的质粒上,并将所得的重组质粒导入酵母菌时,应选择缺乏________能力的酿酒酵母作为受体菌。

(7)将经上述流程培养获得的转基因酿酒酵母接种在含葡萄糖和木糖的培养基中进行酒精发酵能力测试。随着发酵的进行,若该酿酒酵母能够存活,说明它能____________________,即说明所需菌株培育成功。

 

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某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验,实验包括制备培养基、灭菌、接种、培养及菌落观察与计数,请回答与此实验相关的问题:

(1)培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了____________________。除此之外,培养基还必须含有的基本成分是____________________

(2)对培养基进行灭菌,应该采用的方法是___________________________________

(3)为了尽快观察到细菌培养的实验结果,应将接种了湖水样品的平板置于__________中培养,培养的温度设定在37 ℃,要使该实验所得结果可靠,还应该同时在另一平板上接种__________作为对照进行实验。

(4)培养20小时后,观察到平板上有各种形态和颜色不同的菌落,这说明湖水样品中有______________种细菌,一般说来,菌落总数越多,湖水遭受细菌污染的程度越__________

(5)如果提高培养基中NaCl的浓度,可以用于筛选耐__________细菌,这种培养基被称为______________

 

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金黄色葡萄球菌是一种具有高度耐盐性的微生物,可引起人类肺炎、肠炎等疾病。金黄色葡萄球菌在血平板(培养基中添加适量血液)上生长时,可破坏菌落周围的红细胞,使其褪色。下图为定性检测鲜牛奶中是否存在金黄色葡萄球菌的操作流程,请回答相关问题:

(1)按细胞结构分类,金黄色葡萄球菌属于__________生物,从培养过程分析,金黄色葡萄球菌可进行______呼吸。

(2)7.5% NaCl肉汤培养基为微生物提供的营养成分包括____________________________,用7.5% NaCl肉汤培养基进行选择培养的主要目的是__________________________________

(3)操作中在血平板上的接种方法是______________,接种操作前后需要对接种工具进行________灭菌。

(4)在制备血平板时需将pH调节至__________(填“微酸性”或“微碱性”)后灭菌,待培养基__________后,再加入适量血液。按培养基功能分类,血平板属于______培养基。

(5)经多次规范操作、重复实验,血平板上均出现________________的菌落,初步证明鲜牛奶中存在金黄色葡萄球菌,但鲜牛奶供应商仍认为此菌并非鲜牛奶所携带,因此,要对本操作进行完善,完善的方案是_____________________________________________________

 

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