Question

大肠杆菌是人和动物肠道中普遍存在的一种兼性厌氧菌，在无氧条件下，大肠杆菌通过发酵能将葡萄糖转变为多种有机酸并产生CO₂等气体。某研究机构使用“滤膜法”对受污染的河流水体进行了大肠杆菌活菌数目的测定。请回答下列问题：

(1)为了鉴别大肠杆菌菌落，可向培养基中加入________________________作为指示剂。

(2)测定大肠杆菌活菌数目时，需制备牛肉膏蛋白胨固体培养基，该培养基中为细菌提供氮源的物质是__________________。

(3)为了便于统计污染严重的水体中活菌的数目，需将水样进行适当稀释，例如取水样1 mL加入无菌水________________ mL制备稀释倍数为10²的稀释液，并照此依次制备更高倍数的稀释液。每个稀释倍数的菌液取10 mL进行过滤，然后将滤膜放置在培养基上。为了防止杂菌污染，稀释、过滤和旋转滤膜等操作都应该在________附近进行。

(4)将放有滤膜的平板置于适宜条件下培养，每隔12 h统计一次菌落数目，应选取菌落数目________时的记录作为结果。如果经过培养后稀释倍数为10²的4个平板上菌落数分别为43、47、42、48，那么每升河水中约含大肠杆菌________个。用这种方法测定的细菌数量比实际活菌数量要少，这是因为________________________________________________________________________。

Answer

伊红－美蓝 牛肉膏和蛋白胨 99 酒精灯火焰 稳定 4.5×106 当两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的是一个菌落

【解析】试题分析：水中大肠杆菌的检测可以用滤膜法进行，可以用伊红美兰培养基进行鉴别；活菌计数法应取几个平板上菌落的平均数来计算，计算方法为菌落数÷菌液体积×稀释倍数。

(1)为了鉴别大肠杆菌菌落，可向培养基中加入伊红和美蓝作为指示剂，观察是否出现深紫色并伴有金属光泽的菌落。

(2)牛肉膏蛋白胨固体培养基中为细菌提供氮源的物质是牛肉膏和蛋白胨。

(3)对水样进行稀释时，取水样1 mL加入无菌水99 mL可制备稀释倍数为102的稀释液。为了防止杂菌污染，稀释、过滤和旋转滤膜等操作都应该在酒精灯火焰附近的无菌区进行。

(4)将放有滤膜的平板置于适宜条件下培养，每隔12 h统计一次菌落数目，应选取菌落数目稳定时的记录作为结果。经过培养后稀释倍数为102的4个平板上菌落数平均为(43＋47＋42＋48)÷4＝45(个)，那么每升河水中约含大肠杆菌45×102×1 000＝4.5×106(个)。由于当两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的是一个菌落，所以用这种方法测定的细菌数量比实际活菌数量要少。