Question

下图为兰州环保部门对流经我市黄河中段水域大肠杆菌进行检测的操作和配方图。据图回答下列相关问题：

   

（1）图甲中滤膜的孔径应_____（填“大于”或“小于”）大肠杆菌，该计数方法的名称是_________。

（2）配制图乙中的基础培养基时，除了水分、无机盐和琼脂以外，还应加入__________。待各成分都熔化后,调整pH和灭菌，待冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰附近___________。大肠杆菌在伊红美蓝培养基上生长呈黑色菌落，从功能上划分，该培养基属于_________培养基。

（3）用平板划线法分离样液中的大肠杆菌，操作时，接种环通过灼烧灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次划线的末端开始划线的目的是_________。

（4）要检测样液中的大肠杆菌含量，取1ml河水样本，加入9ml无菌水，充分混匀后，在5个平板上用涂布平板法分别接入0.1ml样液，在37℃的培养箱中放置48小时，5个平板上的黑色菌落数分别为5、51、50、49、102。据此可得出1ml河水样本中活菌数为____个。

Answer

小于 滤膜法 氮源（蛋白胨） 倒平板 鉴别 将聚集的菌体逐步稀释，以便获得单个菌落 5×103（或5000）

【解析】试题分析：熟记并理解微生物的实验室培养、微生物的分离与计数的相关基础知识、形成清晰的知识网络。在此基础上从题图中提取信息并结合题意作答。

(1)图甲操作的目的是用滤膜过滤待测水样，以获得大肠杆菌，因此滤膜的孔径应小于大肠杆菌，该计数方法的名称是滤膜法。

(2)各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、无机盐、碳源、氮源。图乙中的乳糖可为微生物的生长提供碳源，据此可知：在配制图乙中的基础培养基时，除了水分、无机盐和琼脂以外，还应加入氮源。为了避免杂菌污染，倒平板时，应在酒精灯火焰附近进行操作。伊红美蓝培养基上生长的大肠杆菌菌落呈现黑色，从功能上划分，该培养基属于鉴别培养基。

(3) 用平板划线法分离样液中的大肠杆菌的操作时，在第二次及以后划线时，总是从上一次划线的末端开始划线的目的是：将聚集的菌体逐步稀释，以便获得单个菌落。

(4) 由题意可知：将10倍的稀释液分别涂布到5个平板上培养，每个平板均接种了0.1mL样液，在37℃的培养箱中放置48小时，5个平板上的黑色菌落数分别为5、51、50、49、102。统计菌落数目时，应将菌落数明显最少和最大的舍弃，所以0.1mL稀释液中平均有(51＋50＋49)÷3＝50个活菌，每毫升稀释液中活菌的数目为50÷0.1＝500，则1ml河水样本中活菌数为500×10＝5000＝5×103个。