Question

（五）回答下列有关基因工程的问题。

     利用大肠杆菌作为受体，可以将人生长激素基因导入其中，最后合成人生长激素（蛋白质），从而大批量生产这种基因工程药物。

1.获取人生长激素目的基因的方法有两种。一是________，二是先确定目的基因在细胞DNA分子上的位置，这叫________，然后用________酶从人体细胞内分离。

基因工程中根据需要常对运载体质粒进行适当的改造。pIJ702是一种常用质粒（5.7kb，1kb=1000对碱基），限制酶SacⅠ、SphⅠ在pIJ702上分别只有一处识别序列，如图14所示。

2.以SacⅠ和SphⅠ切取的目的基因置换pIJ702上0.6kb（1kb=1000对碱基）的SacⅠ/SphⅠ片段，构成重组质粒pZHZ8（6.7kb），由此判断目的基因为________ kb。将目的基因和质粒重新连接的酶是________。

图15显示含目的基因的DNA片段、限制酶MunⅠ和EcoRⅠ的识别序列（其中箭头所指部位为限制酶的切割位点，四种质粒的阴影部分表示标记基因）。

3.据图15分析，不适合作为目的基因载体的质粒是________。

A. ①③    B. 全都不适合    C. ②④    D. ①④

4.下列有关转基因技术与环境安全的叙述错误的是________。

A. 重组DNA的微生物在降解污染物的过程中可能会产生二次污染

B. 种植抗虫棉可以减少农药的使用量，对环境没有任何负面影响

C. 植物转基因技术产生的基因可向其他植物扩散，影响生物的多样性

D. 转基因生物所带来的环境安全问题在今后有可能得到解决

Answer

1.化学方法人工合成基因定位限制酶

2.1.6DNA连接酶

3.C

4.B

【解析】基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

1.获取人生长激素目的基因的方法有两种：一是化学方法人工合成，二是先确定目的基因在细胞DNA分子上的位置，这叫基因定位，然后用限制酶从人体细胞内分离。

2.pIJ702的长度为5.7kb，其中SacⅠ/SphⅠ片段的长度为0.6kb，该片段被目的基因置换后构成的重组质粒pZHZ8，其长度为6.7kb，由此判断目的基因为6.7-（5.7-0.6）=1.6 kb。将目的基因和质粒重新连接的酶是DNA连接酶。

3.限制酶MunⅠ和EcoRⅠ的识别序列不同，但两者切割产生的黏性末端相同，因此运载体应该有限制酶MunⅠ或EcoRⅠ的识别序列，但该序列不应该位于标记基因上．因此，不适合作为目的基因载体的质粒是②④。

4.重组DNA的微生物在降解污染物的过程中可能会产生二次污染，A正确；种植抗虫棉可以减少农药的使用量，减少环境污染，但转基因植株可能会导致基因污染，进而影响生物多样性，B错误；植物转基因技术产生的基因可向其他植物扩散，影响生物的多样性，C正确；转基因生物所带来的环境安全问题在今后有可能得到解决，D正确。