Question

下表为培养某种微生物的培养基配方，请回答有关问题：

（1）根据配方可知该培养基只允许分解_________的细菌生长,从功能上看,这种培养基被称作_____培养基。为防止杂菌污染，对培养基采用的灭菌方法是______________。

（2）若要通过统计培养基中菌落数来估计样品中的细菌数，上述培养基中还需要添加__________，接种时应采用__________法。该方法接种培养后的菌落如下图，其中适合用于计数的平板是________。

（3）某同学涂布平板时用0.lmL稀释液,稀释液的稀释倍数为10⁵,平板中测得菌落数分别为17、156、179、451、175,则每1mL样品中的细菌数约是_______个。从土壤中分离出分解尿素的细菌后，要对其作进一步的鉴定，可在上述培养基中加入_____________。

Answer

尿素 选择 高压蒸汽灭菌 凝固剂（或琼脂） 稀释涂布平板法 C 1.7×l08 酚红指示剂

【解析】分析：选择培养基是在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学物质，抑制不需要的微生物的生长，有利于所需微生物的生长。稀释涂布平板法计数时，首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。

（1）该培养基以尿素为唯一氮源，只允许分解尿素的细菌生长，故这种培养基称为选择培养基。该培养基会抑制其它种类微生物生长，其原因是该培养基以尿素为唯一的氮源，不能利用尿素的细菌不能在该培养基上生长。为防止杂菌污染，对培养基采用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌。

（2）若要通过统计培养基中菌落数来估计样品中的细菌数，需用固体培养基，故上述培养基中还需要添加的成分是琼脂，接种时应采用稀释涂布平板法法，该方法接种培养后的菌落，为了尽可能保证每个菌落是由一个细菌繁殖而来，所以适于计数的平板是C，因为菌落多，大小相对均匀。

（3）根据题意，用0.1mL稀释液在稀释倍数为105的平板中测得菌落数（取菌落数在30—300范围内较为准确）的平均值为（156+179+175）/3=170，则每mL样品中的细菌数=平板上菌落数的平均值÷体积×稀释倍数=170÷0.1×105=1.7×108。由于细菌分解尿素的过程中产生了氨，氨使培养基的PH值升高，故从土壤中分离出分解尿素的细菌后，要对其作进一步的鉴定，可在上述培养基中加入酚红指示剂，培养该菌后，如果指示剂变红，可初步鉴定该种细菌能够分解尿素。

【点睛】注意正确理解“选择菌落在30～300的平板”计数

(1)只得到1个菌落数在30～300的平板是错误的。原因是不符合实验的重复原则，易受到偶然因素的影响。

(2)并不是只要得到3个“菌落数在30～300的平板”即可，而应该是涂布的同一稀释度的平板符合“菌落数在30～300的平板”且无较大差异，才能按照计算公式进行计算，如得到3个平板菌落数分别为230、30、240，虽然菌落数均在“30～300”之间，但“30”与“230”“240”差异太大，应重新实验找出原因。