Question

【生物——选修3：现代生物科技专题】

毛角蛋白Ⅱ型中间丝（KIFⅡ）基因与绒山羊的羊绒质量密切相关。获得转KIFⅡ基因的高绒质山羊的简单流程如下图所示：

（1）在①过程中构建的KIFⅡ基因表达载体时，最常用的运载工具是__________；构建成功的基因表达载体上，目的基因应插入__________和__________之间，以便成功表达。

（2）从基因文库中获得的KIFⅡ基因可用______技术进行扩增，其原理是______________。

（3）通过②过程形成的成纤维细胞在培养过程中，将其置于含95%空气加__________的混合气体培养箱中培养，培养中加入__________达到无菌环境。

（4）通过④过程获得的卵（母）细胞，在与成纤维细胞形成重组细胞前，应先通过显微操作去掉__________。

Answer

质粒 启动子 终止子 PCR DNA双链复制 5%CO2 抗生素 细胞核

【解析】试题分析：①图中为构建基因表达载体，②为用胰蛋白酶处理动物组织使其分散成单个细胞，③为获取成熟的去核卵母细胞，之后通过把含目的基因的受体细胞的细胞核移入去核的卵母细胞获得重组细胞，再经过早期胚胎的培育至桑葚胚或囊胚，通过胚胎移植到代孕母羊的子宫内，继续发育，直至分娩出转基因绒三羊。

（1）基因工程中，运载工具包括质粒、噬菌体及动植物病毒等，其中质粒是最常用的运载工具。目的基因要能成功表达，上游必需有启动子，下游必需有终止子，所以构建基因表达载体时，应将目的基因插在启动子和终止子之间。

（2）扩增从基因文库中获得的KIFⅡ基因，可用PCR技术进行，其原理是 DNA双链复制。

（3）在动物细胞培养过程中，为维持培养液的PH值，往往加入5% CO2。培养中为了抑制杂菌的污染，常常应加入一定量的抗生素。

（4）成熟卵(母)细胞在核移植前需要进行去核处理，以保证克隆后代的遗传性状主要来自于供体核。

【点睛】本题有两个易错点：一是目的基因应插在启动子和终止子之间才可能表达；二是流程图中重组细胞的形成是将导入目的基因的细胞核移入去核的卵母细胞。