Question

某校实验小组对某种品牌的酸奶中乳酸菌的数量进行了测定。取6支灭菌的试管，分别加入9mL灭菌的生理盐水，标号为B₁、B₂、B₃、B₄、B₅、B₆；吸取1mL酸奶样液加入试管B₁中，混合均匀；然后另取一支吸管从B₁中吸取1mL溶液，加入B₂中，依次类推，最后从试管B₆中取0.1mL样液进行涂布计数，涂布三个平板，其菌落数分别为251、265、276个。

请回答下列问题：

（1）培养乳酸菌除了必要的________________外，还需在培养基中添加维生素。

（2）制备乳酸菌的培养基过程中，对培养皿灭菌的常用方法是________________；待平板冷凝后，要将平板倒置，其目的是________________________。

（3）该实验小组对乳酸菌接种所采用的方法是________________。根据酸奶样品的稀释倍数和接种稀释液的体积，统计平板上的________；根据三个平板中菌落数，可推测原酸奶中乳酸菌的浓度为________个/mL，该方法测定的乳酸菌的含量和实际值相比，一般________（填“偏大”或“偏小”）。

（4）为了使测量结果更加准确，该实验对照组的设置是________________。

Answer

营养物质 干热灭菌法 防止平板冷凝后，培养皿盖上凝结的水珠落入培养基中造成污染 稀释涂布平板法 菌落数目 2.64×109 偏小 另增设一组培养基，接种等量灭菌的无菌水，其他操作均相同

【解析】试题分析：根据题意，经过6次稀释，每次在1毫升前一次培养液中加入9毫升生理盐水稀释，相当于每次都将前一次的培养液稀释10倍，所以最后的计数培养液与最先的培养液相比，共稀释了106倍。

（1）培养乳酸菌除了必要的碳源、氮源、水、无机盐等营养物质外，还需在培养基中添加维生素。

（2）对培养皿灭菌的常用方法是干热灭菌法，对培养基灭菌常用高压蒸汽灭菌。为了防止平板冷凝后，培养皿盖上凝结的水珠落入培养基中造成污染，要将平板倒置。

（3）为了对稀释的培养液中的乳酸菌的活菌计数，该实验小组所采用的方法是稀释涂布平板法，根据酸奶样品的稀释倍数和接种稀释液的体积，统计平板上的菌落数。结合前面的分析可得，每毫升原酸奶中乳酸菌个数=（251+265+276）÷3×106÷0.1=2.64×109。该方法测定的乳酸菌的含量一般比实际值小， 因为所计数的菌落数有可能是由两个或多个细菌繁殖为一个菌落。

（4）为了排除培养过程中被杂菌污染带来测量结果不准确，通常采取另增设一组培养基，接种等量灭菌的无菌水，其他操作均相同的对照组来避免。

【点睛】注意：稀释涂布平板法实际是通过计数活菌落的平均数来计算细胞数目，为了尽量减小误差，必须多次稀释，所以本题中计算稀释倍数是一个易错点。