在基因工程的操作过程中，构建基因表达载体不需要使用的（ ）
①逆转录酶
②DNA连接酶
③限制酶
④RNA聚合酶
A. ②③ B. ②④ C. ①④ D. ①②
建立基因文库时，下列最可能作为载体是的（ ）
A. 大肠杆菌 B. 大肠杆菌的质粒 C. 链状DNA分子 D. 环状RNA 分子
胡萝卜素是一种常用的食用色素，可分别从胡萝卜或产胡萝卜素的微生物菌体中提取获得，流程如下：
（1）从胡萝卜中提取胡萝卜素时，常用石油醚作溶剂，原因是_______________________。影响胡萝卜素提取的因素很多，主要取决于____________________________。一般来说，提取胡萝卜素时，提取效率与原料颗粒的含水量成________关系。
（2）从胡萝卜中提取胡萝卜素的常用方法是__________，将提取的胡萝卜素粗品通过__________方法进行鉴定。
（3）新鲜的胡萝卜含有大量水分，在干燥时要注意___________________，因为___________________。萃取过程中宜采用____________方式加热，因为__________________________________。在加热瓶口按照回流冷凝装置的目的是__________________。
（4）在鉴定时，等标准样品和萃取样品中各种色素完全分开后，取出滤纸，让石油醚自然挥发后，通过观察_______________________________，来说明萃取样品是否也含有β-胡萝卜素。
下面是提取柠檬油的实验操作流程图，请根据流程图回答问题：
（1）A是_______，具有_________________________________________________的作用。
（2）压榨是个机械加压过程，要求既要将原料压紧，防止原料滑脱，又要将__________挤压出来。
（3）C过程一般加入___________________________，其目的是使________________。
（4）D过程为_________，目的是______________________________。
（5）不采取水中蒸馏法提取柠檬精油的原因是：水中蒸馏法会导致_________________。
某化工厂的污水池中含有一种有害的难以降解的有机化合物A。研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功筛选到能高效降解化合物A的细菌(目的菌)。实验的主要步骤如图所示。请分析回答下列问题：
(1)培养基中加入化合物A的目的是________________，这种培养基属于__________培养基。
(2)“目的菌”生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的____________。实验需要振荡几次进行培养，由此推测“目的菌”的代谢类型是__________。
(3)转为固体培养基时，常采用平板划线的方法进行接种，在进行下一区域划线前要将接种环____________________。
(4)研究人员统计污水池中“目的菌”的总数，选用10－4、10－5、10－6稀释液进行涂布平板，每种稀释液都设置了3个培养皿。从设计实验的角度看，还应设置的一组对照实验是_____________________，此对照实验的目的是______________________________。
(5)研究人员采用平板划线法纯化水样中分离出的细菌。操作时，在第二次及以后的划线，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是________________________________。
划线的某个平板培养后，第一划线区域的平行线上都不间断地长满了菌落，第二划线区域所划的第一条平行线上无菌落，其他平行线上有菌落。造成第一条平行线无菌落可能的操作失误有_____________________。
(6)在示意图A和图B中，________表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。
某兴趣小组对受污染的河流水体进行了大肠杆菌数目的测定。请回答问题：
（1）测定大肠杆菌活菌数目时，需制备牛肉膏蛋白胨固体培养基，该培养基中为细菌提供氮源的物质是______________。培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右才能用来倒平板，你用什么办法来估计培养基的温度？_____________。等待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置的原因是____________________。为了鉴别大肠杆菌菌落，可向培养基中加入伊红美蓝作为指示剂，大肠杆菌的菌落呈现__________。
（2）为了便于统计污染严重的水体中活菌的数目，需将水样进行适当稀释，例如取水样2mL，加入无菌水________mL制备稀释倍数为101的稀释液，并照此依次制备更高倍数的稀释液。每个稀释倍数的菌液取10mL进行过滤，然后将滤膜放置在培养基上。为了防止杂菌污染，稀释、过滤和旋转滤膜等操作都应该在__________进行。
（3）将放有滤膜的平板置于适宜条件下培养，每隔12h统计一次菌落数目，应选取菌落数目____________时的记录作为结果。如果经过培养后稀释倍数为102的4个平板上菌落数分别为43、47、42、48，那么每升河水中约含大肠杆菌_______个。用这种方法测定的菌落数量往往比实际活菌数量更_______，这是因为_____________。
（4）除了上述活菌计数法外，显微镜直接计数也是测定细菌数量的常用方法。利用血细胞计数板（2mm×2mm）、滴管、试管、显微镜等仪器进行研究，从试管中吸出培养液进行计数之前，应将_________________；采用抽样检测的方法，先_______________计数室上，再_______________________，让培养液自行渗入计数室（厚度为0.1mm）；需稍等片刻，待____________________时，再将血细胞计数板放在显微镜下观察计数。已知计数板每小格为0.1mm×0.1mm，经随机检测，五个小方格内细菌平均数为8.2个，则细菌密度_________个/L。
