Question

回答下列（一）（二）小题

(一）请回答果醋制作和醋化醋杆菌扩大培养及筛选的相关问题：

(1)醋酸杆菌在_________条件下才能将乙醇转化为醋酸，因此需要持续往发酵瓶中通入足量的_______。

(2)底物充足条件下，醋酸发酵液pH值变化是________(A.持续变大B.先变大后稳定C.持续变小D.先变小后稳定）。

(3)对醋酸杆菌进行扩大培养所需的液体培养基（1L)配方为：蛋白胨3g、酵母提取物5g、______25g和蒸馏水，并调PH至______，再用_______法进行灭菌。若要分离醋酸杆菌，还需在上述的培养基中加入适量的______________。

(二）请回答利用基因工程生产人胰岛素的相关问题：

(1)先从人体___________细胞中获取控制人胰岛素合成的mRNA,然后在_______酶催化下合成人胰岛素基因。

(2)构建重组DNA分子通常需要_______的限制性核酸内切酶分别切割目的基因和载体，然后用DNA连接酶使两者连接在一起。

(3)大肠杆菌的会________阻碍重组DNA进入细胞，通常使用氯化钙处理大肠杆菌。

(4)为检测目的基因是否在大肠杆菌中高效稳定表达，最简单有效的方法是__________(A.检测大肠杆菌中有无人胰岛素基因B.检测培养基中葡萄糖浓度C.检测大肠杆菌中人胰岛素基因mRNA含量D.检测培养基中胰岛素含量）。人胰岛素基因能在大肠杆菌中表达是因为人和大肠杆菌共用______。

(5)胰岛素除了用于治疗糖尿病之外，还可以用来提高动物______________形成率。

Answer

有氧 经过滤的空气 D 甘露醇 7.0 高压蒸汽灭菌 琼脂 胰岛β 逆转录 相同 细胞壁 D —套遗传密码 细胞克隆

【解析】（一）（1）醋酸杆菌是需氧型细菌，所以只有在有氧条件下才能将乙醇转化为醋酸，因此需要持续往发酵瓶中通入足量的经过滤的空气。

（2）底物充足条件下，醋酸发酵液有氧不断产生醋酸，使pH值不断减小，但减小到一定程度之后，会导致醋酸杆菌无法继续产生醋酸，所以最后稳定，综上所述，选D。

（3）对醋酸杆菌进行扩大培养所需的液体培养基（1L)配方为：蛋白胨3g、酵母提取物5g、甘露醇25g和蒸馏水，并调PH至7.0，再用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。若要分离细菌，必需固体培养基，所以应在上述的培养基中加入适量的凝固剂——琼脂。

（二）基因工程制取胰岛素：反转录法获取目的基因→构建基因表达载体→将目的基因导入受体细胞→对目的基因进行检测和鉴定。

（1）由于胰岛素只能在胰岛β细胞内表达，胰岛素基因才会转录处相应的mRNA。为了通过基因工程制取胰岛素，若采用逆转录法获得目的基因，所以必需先从人体胰岛β细胞中获取控制人胰岛素合成的mRNA，然后在反转录酶催化下合成人胰岛素基因。

（2）构建重组DNA分子时，为了保证目的基因能与运载体链接，通常需要相同的限制性核酸内切酶分别切割目的基因和载体，然后用DNA连接酶使两者连接在一起。

（3）为了增大大肠杆菌的细胞壁的通透性，通常使用氯化钙处理大肠杆菌。

（4）如果目的基因在大肠杆菌中高效稳定表达，最简单有效的检测方法是检测培养基中胰岛素含量，所以选D。人胰岛素基因能在大肠杆菌中表达是因为人和大肠杆菌共用一套遗传密码。

（5）胰岛素除了用于治疗糖尿病之外，还可以用来提高动物细胞克隆形成率。

【点睛】熟悉基因工程的操作步骤以及注意事项。