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下图表示含有目的基因D的DNA片段长度(bp即碱基对)和部分碱基序列,图右表示一...

下图表示含有目的基因D的DNA片段长度bp即碱基对和部分碱基序列,图右表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspI、BamHI、MboI、SmaI 4种限制性核酸内切它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。

 

1若用限酶SmaI完全切割图中含有目的基因D的DNA片段,其产物长度分为            。 若图左DNA分子中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换,那么基因D就突变为基因d。从隐形纯合子中分离出图示对应的DNA片段,用限制酶Sma I完全切割,产物中共有           种不同长度的DNA片段。

2为了提高试验成功率,需要通过         技术扩增目的基因,以获得目的基因的大量拷贝。在目的基因进行扩增时,加入的引物有A、B两种,若该目的基因扩增n代,则其中含有A、B引物的DNA分子有        个。

3若将图中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行连接,形成重组质粒,那么应选用的限制酶是           

为了筛选出成功导入含目的基因D的重组质粒的大肠杆菌,首先将大肠杆菌在

           的培养基上培养,得到如图示的菌落。再将灭菌绒布按到培养基上,使绒布面沾上菌落,然后将绒布按到含       的培养基上培养,得到如图2的结果空圈表示与图1对照无菌落的位置。挑选目的菌的位置为         

5若目的基因在工程菌中表达产物是一条多肽链,如考虑终止密码,则其至少含有的氧原子数为     

 

(1)537、790、661 2 (2)PCR 2n-2 (3)BamH1 (4)抗生素B 抗生素A 图1培养基中对应图2中消失的菌落 (5)340 【解析】 试题分析:⑴限制酶SmaⅠ的酶切位点是CCC↓GGG,完全切割图1中DNA片段,产生的末端是平末端;在图1中有两个限制酶SmaⅠ的酶切位点,DNA将被切割成三个片段,结合图解,三个片段的长度分别是537 bp、790 bp、661 bp。发生基因突变后的d基因片段只有一个限制酶SmaⅠ酶切位点,完全切割后出现两个片段长度分别是1327 bp、661 bp。 (2)通过PCR技术可扩增目的基因,以获得目的基因的大量拷贝。在目的基因进行扩增时,加入的引物有A、B两种,若该目的基因扩增n代,则其中含有A、B引物的DNA分子有2n-2个。 ⑶在构建重组质粒时,目的基因D不能用限制酶MspⅠ和SmaⅠ,这两种限制酶切割的位点在目的基因的中间,如果切割目的基因D会被破坏;也不能用限制酶MboⅠ,它在目的基因上有两个酶切位点,如果切割质粒上的标记基因会被破坏,就没办法进行重组质粒的检测,故应选用限制酶BamHⅠ。 (4)用限制酶BamHⅠ切割质粒会破坏抗生素A抗性基因,保留抗生素B抗性基因,为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌,一般需要用添加抗生素B;挑选目的菌的位置为图1培养基中对应图2中消失的菌落。 (5)目的基因有1020个碱基对,如考虑终止密码,翻译合成的多肽链有339个氨基酸,则其至少含有的氧原子数为339×2-338=340。 考点:基因工程及蛋白质合成  
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考点分析:
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科学家将人的生长激素基因与某种细菌不含抗生素抗性基因的DNA分子进行重组,并成功地在该细菌中得以表达如下图。请据图分析回答:

(1)过程①所示获取目的基因的方法是       

(2)细菌是理想的受体细胞,这是因为它                                        (写出至少两点)。

(3)质粒A与目的基因结合时,首先需要用     酶将质粒切开“缺口”,然后用       酶将质粒与目的基因“缝合”起来。

(4)若将细菌B先接种在含有        的培养基上能生长,说明该细菌中已经导入外源质粒,但不能说明外源质粒是否成功插入目的基因; 若将细菌B再重新接种在含

       的培养基上不能生长,则说明细菌B中已经导入了插入目的基因的重组质粒。

(5)检测工程菌中的生长激素基因是否转录出mRNA和是否翻译出生长激素,可采用的技术分别是                

 

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某质粒上有Sal、Hind、BamH三种限制酶切割位点,同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如图所示,请回答下列问题。

(1)将抗盐基因导入烟草细胞内,使烟草植株产生抗盐性状,这种新性状(变异性状)的来源属于________。

(2)如果将抗盐基因直接导入烟草细胞,一般情况下,烟草不会具有抗盐特性,原因是抗盐基因在烟草细胞中不能________,也不能________。

(3)在构建重组质粒时,应选用________和________两种酶对_______和____        进行切割,以保证重组DNA序列的唯一性。

(4)将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株需要用               技术,经过____           进而形成完整植株,此过程除营养物质外还必须向培养基中添加_____ _            

(5)为了确定抗盐烟草是否培育成功,既要用放射性同位素标记的________作探针进行分子杂交检测,又要用                   的方法从个体水平鉴定烟草植株的耐盐性。

 

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A要促进花粉细胞分裂和生长,培养基中应有生长素和乙烯等激素

B愈伤组织形成的前后过程中,不需要光照

C这种利用花药离体培养成的试管苗属于单倍体。要使它繁殖后代只能用一定浓度的秋水仙素处理幼苗

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B杂合双链区的存在表示两种生物携带的遗传密码相同

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