Question

为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。请回答下列问题：

（1）若想检测水样中细菌含量，常采用______________法进行接种。从物理性质看选用的培养基属于______________培养基。在接种前，需要先选取若干灭菌后的空白平板进行培养，其目的是______________。

（2）该研究小组将1mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0．1 mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升水样中的活菌数为______________。对获得的目的菌种，可采用______________的方法长期保存。

（3）该小组采用平板划线法分离水样中的细菌，操作时，接种环通过______________灭菌。在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是____________________________。

Answer

（1）稀释涂布平板 固体 检测培养基平板灭菌是否合格

（2）3．8×107 甘油管藏

（3）灼烧 将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落

【解析】

试题分析：（1）稀释涂布平板法可以用来进行微生物的分离和计数，可利用稀释涂布平板法进行该水样的细菌数量的测定。从物理性质看选用的培养基属于固体培养基。涂布接种前，随机取若干灭菌后的空平板培养一段时间，观察培养基上是否有菌落生成，用来进行对照，以检测培养基平板灭菌是否合格。

（2）利用平板菌落计数法的计算公式估算水样中的活菌数：×M＝×100＝3．8×107/L。对获得的目的菌种，可采用甘油管藏的方法长期保存。

（3）接种环用灼烧进行灭菌。在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线，这样做的目的是：通过划线次数的增加，使每次划线时菌体的数目逐渐减少（将聚集的菌体逐步稀释），以便得到单个菌落。

考点：微生物的分离和鉴别

【名师点睛】统计菌落数目的方法

（1）显微镜直接计数法

①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量。

②方法：用计数板计算。

③缺点：不能区分死菌与活菌。

（2）间接计数法（活菌计数法）

①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。

②操作：

a．设置重复组，增强实验的说服力与准确性。

b．为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。

③计算公式：每克样品中的菌株数＝（C÷V）×M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数。