Question

草甘膦的除草机制是抑制植物体内EPSPS酶的合成，最终导致植物死亡。但它的使用有时也会影响到农作物的正常生长。目前，已发现可以从一种抗草甘膦的大肠杆菌突变株中分离出EPSPS基因，若将该基因转入农作物植物细胞内，从而获得的转基因植物就能耐受高浓度的草甘膦。

（1）将图1①的DNA用HindⅢ、BamHⅠ完全酶切后，反应管中有        种DNA片段。

（2）假设图1中质粒原来BamHⅠ识别位点的碱基序列变为了另一种限制酶BclⅠ的碱基序列，现用BclⅠ和HindⅢ切割质粒，则该图1中①的DNA右侧还能选择BamHⅠ进行切割，并获得所需重组质粒吗？______ 请说明理由                                。

（3）若上述假设成立，并成功形成重组质粒，则重组质粒(      )

A．既能被BamHⅠ也能被HindⅢ切开     

B．能被BamHⅠ但不能被HindⅢ切开

C．既不能被BamHⅠ也不能被HindⅢ切开 

D．能被HindⅢ但不能被BamHⅠ切开

(4）要想检测导入的EPSPS基因是否表达，在分子水平上可用          方法进行检测。

Answer

（1）4 （2）能 切割后露出的黏性末端相同 （3）D （4）抗原-抗体杂交

【解析】（1）由于上述两种酶形成的末端不一样，所以被两种不同的限制酶切割之后所形成的片段有AA、AB、BA、BB四种切法形成的四种片段。（2）设A表示HindⅢ，B表示BamHⅠ。同时被两种限制酶切割有两种不同的目的基因，即AB和BA，所以重组质粒有两种。Bstl与BamHⅠ酶切割的末端一样，所以同时用这两种限制酶切割只能形成一种目的基因，所以只能形成一种重组质粒，重组质粒的形成需用DNA连接酶将目的与质粒相连；质粒要进行复制才能更多的表达出产物，所以重组之后要能复制。（3）根据酶切位点和识别的碱基序列可知，重组质粒只能被能被HindⅢ但不能被BamHⅠ切开。（4）从图22可知，a链形成是以DNA一条链作为模板进行转录形成的信使RNA分子，不同组织细胞的相同DNA在转录时，如果是相同基因一般转录起点相同，不同的基因转录起点不同，检测目的基因是否在受体细胞内表达的分子水平上的检测是向分泌物中加入抗体，通过抗原—抗体特异性结合形成杂交带加以检测，如果能形成，说明表达了，如果不能形成，说明没有表达。

【考点定位】基因工程的操作工具和基本步骤