Question

据报道，从部分企业生产的速冻食品中检出葡萄球菌超标，“细菌门”事件引起公众普遍关注。葡萄球菌能分解卵黄中的卵磷脂，在含卵黄的固体培养基上形成的菌落周围会出现特有的乳白色的乳浊环。请回答下列问题。

（1）某兴趣小组欲检测某果汁类食品中含有葡萄球菌，请帮他们完善下列步骤。

①配制培养基：称取适量的牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂等，加入蒸馏水，搅拌加热至完全溶解后调节PH,分装到锥形瓶后进行       ，在无菌状态下加入卵黄液（100mL10%灭菌NaCl溶液中加一个鸡蛋黄，振荡均匀）摇匀后立即倒平板。

②接种：取待检测果汁2.5ml加入22.5ml灭菌生理盐水中，制成接种样液。

实验组：将接种样液用        法接种在含卵黄的固体培养基上。

对照组：将        用划线法接种在含卵黄的固体培养基上或不接种作为     对照。

将上述接种后的培养皿同时放在36℃的恒温箱中培养48h。

观察：通过观察培养基表面                                             。

（2）培养基中的牛肉膏和蛋白胨为葡萄球菌生长和繁殖提供         。

葡萄球菌能耐受高浓度的NaCl溶液，所以在配制培养基时加入              可以将它分离出来，此培养基属于     培养基。

（3）若要统计某土壤样品中该活菌数目，宜采用        法。在此操作中将1mL的菌液稀释1000倍，最后在培养的在三个平板上统计的菌落数分别是120、121和125。据此可得出每克土壤中该细菌的含量为   个。

Answer

（1）①高压蒸汽灭菌（1分）

②平板划线 25ML无菌生理水 空白

③是否出现周围有乳浊环的菌落

（2）碳源和氮源 高浓度的NaCl溶液 选择

（3）稀释涂布平板 1.22×109（1220000000）

【解析】(1)①配制培养基时,分装之后要进行灭菌处理.②因为对照组使用平板划线法,故实验组也要采用平板划线法;空白对照组不接种,或将无菌生理盐水接种在含卵黄的固体培养基上.观察实验结果是否有葡萄球菌,从题干中可以知道,关键是观察培养基表面是否出现周围有乳浊环的菌落.

(2)牛肉膏和蛋白胨中含有蛋白质,故能为葡萄球菌的生长和繁殖提供碳源和氮源;高浓度的NaCl溶液可以把葡萄球菌分离出来,故该培养基属于选择培养基.

(3)要统计土壤中的活菌数目,最好采用稀释涂布平板法,显微镜直接计数不能区分死菌和活菌.培养基灭菌后，将1mL水样稀释1000倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液，经适当培养，3个平板上统计的菌落数分别是120、121和125，据此可得出（120+121+125）/3×1000×10×1000=1.22×109.

【考点定位】微生物的分离和培养

【名师点睛】微生物的分离

①利用该分离对象对某一营养物质的“嗜好”,专门在培养基中加入该营养物质,使该微生物大量增殖.这些物质主要是一些特殊的碳源、氮源,如纤维素可用来富集纤维素分解微生物,尿素可用来富集尿素分解微生物.

②利用该分离对象对某种抑制物质的抗性,在混合培养物中加入该抑制物质,经培养后,因为原来占优势的它种微生物的生长受到抑制,而分离对象却可趁机大量增殖,使之在数量上占优势.如筛选酵母菌和霉菌,在培养基中加入青霉素,因青霉素可抑制细菌和放线菌的细胞壁的合成,从而抑制两类微生物的生长,而酵母菌和霉菌正常生长增殖.