重叠延伸PCR技术是一种通过寡聚核苷酸链之间重叠的部分互相搭桥、互为模板，通过多次PCR扩增，从而获得目的基因的方法。该技术在扩增较长片段的DNA、不同来源的DNA片段拼接、基因的定点诱变等方面具有广泛的应用前景。右图是利用重叠延伸PCR技术扩增某目的基因的过程。其主要没计思路是用具有互补配对片段的引物（图中引物2、引物3），分别PCR，获得有重叠链的两种 DNA片段，再在随后的扩增反应中通过重叠链的延伸获得目的基因。结合所学知识，分析下列问题。
（1）引物中G+C的含量影响着引物与模板DNA结合的稳定性，引物中G+C的含量越高，结合稳定性______。
（2）在第一阶段获得两种具有重叠片段DNA的过程中，必须将引物l、2和引物3、4置于不同反应系统中，这是因为________。
（3）若在引物l和引物2组成的反应系统和引物3、引物4组成的反应系统中均复制一次，共产生________种双链DNA分子。
（4）在引物1、引物2组成的反应系统中，经第一阶段形成图示双链DNA至少要经过________ 次复制。
（5）若利用微生物扩增该目的基因，其基本步骤包括：________、________、微生物的筛选和培养、从菌群中获取目的基因。
下图表示应用现代生物技术制备H7N9病毒单克隆抗体的流程，请回答下列问题：
（1）①过程表示________，②过程用到的工具酶是________。
（2）构建重组质粒时可选用四种限制酶，其识别序列如下图。为防止酶切片段的自身环接，可选用的限制酶组合是（ ）
A．①② B．①③ C．②④ D．③④
（3） 细胞Ⅰ是________，细胞Ⅱ的特点是________。对于转基因成功的细胞Ⅱ还要进行克隆化培养和________检测，经多次筛选获得足够数量的该类细胞。体外培养细胞Ⅱ，首先应保证其处于________的环境。
（4）若要预防H7N9禽流感，可用图中的________作为疫苗。对该传染病疑似患者确诊时，可从疑似患者体内分离病毒，与已知病毒进行________比较，或用图中的________进行特异性结合检测。
长期以来，香蕉生产遭受病害的严重威胁，制约了其发展。目前，随着转基因抗病香蕉基因工程技术的日趋成熟，为培育抗病香蕉品种开辟了新途径。转基因抗病香蕉的培育过程如图所示，质粒上有Pst I、Sma I、EcoR I、Apa I等四种限制酶切割位点。请回答：
（1）构建含抗病基因的表达载体A时，应选用限制酶___________，对含病毒基因的DNA和质粒，进行切割：能死抗，A中能使抗病毒基因在香蕉细胞中特异性表达的调控序列是___________，其中培养基中的卡那霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞的生长，欲利用该培养基筛选已导人抗病基因的香蕉细胞，应使基因表达载体A中含有___________，作为标记基因。
（2） 目的基因能在香蕉细胞中稳定遗传的关键是___________；香蕉组织块经过①②获得转基因抗病植株，其依据的原理是___________。
（3） 香蕉具有不耐储存的特点，科学家把控制香蕉成熟的基因导入香蕉，获得转基因延熟香蕉，储存时间可以延长两个周。在延熟过程中，R蛋白起着很关键的作用。如果用蛋白质工程来生产R蛋白，应从预期的蛋白质的功能出发来设计___________，再推测应有的氨基酸序列。
（4）科学家把得到的抗病香蕉和耐储存的香蕉做成了人工种子，人工种子就是以植物组织培养得到的___________等为材料，经过人工薄膜包装得到的种子，在适宜条件下同样能够萌发长成幼苗。
利用生物工程技术，可从转基因牛乳汁中分离获得人凝血因子IV，用于血友病的治疗。下图是转基因克隆牛的培育过程，请据图回答：
（1）过程①采用的是细胞工程中的 技术，过程③采用的是胚胎工程中的 技术。
（2）用于核移植的供体细胞一般都选择10代以内的细胞，目的是保持细胞正常的 ；卵母细胞除从活体输卵管中采集外，还可从已处死的母牛的 中获取； 采集的卵母细胞需人工培养至 期时，才具备与精子受精的能力。
（3）在体外胚胎培养时，应选用囊胚的 进行DNA分析性别鉴定，以便选择雌性胚胎。
（4）转基因奶牛的克隆成功，说明了 。
多不饱和脂肪酸需要从膳食中摄取，而不能被人体直接合成。科学家通过转基因手段将ω-6脂肪酸脱氢酶基因（FAT1）整合到肉牛基因组．以期提高肉牛体内的多不饱和脂肪酸含量,促进人类健康。请回答下列问题。
（1）在用PCR技术扩增目的基因时，需要的条件主要有扩增缓冲液、模板DNA、4种原料、特定引物和 ；将ω-6脂肪酸脱氢酶基因导入肉牛细胞中常用的方法是 ；作用DNA分子杂交技术检测转基因牛的DNA上是否插入了目的基因，需以 作为探针。
（2）体外受精获得受精卵前，将优良公牛的精子收集后放在一定浓度的肝素溶液中进行培养，其目的是 。
（3）下列有关胚胎移植的叙述错误的是（ ）
A．应选择健康和具有正常繁殖能力的个体作为受体
B．只有供、受体生现状态相同，移入受体的胚胎才能被接受
C．胚胎收集中冲卵指的进从母体输卵管中冲取卵子
D．受体牛对植入子宫的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应
（4） 为加速转基因牛的繁育，扩大其群体，可以采用 、 等方法。
进行生物工程设计时，下表各组的实验目的与所选择实验材料或方法配置都错误的是：
选项 | 实验目的 | 实验材料或方法 |
① | 构建基因表达载体 | 用同种限制酶切割目的基因和质粒 |
② | 动物细胞核移植 | 用去核卵（母）细胞作受体 |
③ | 植物体细胞杂交培育新品种 | 花粉粒 |
④ | 将目的基因导入单子叶植物细胞 | 农杆菌转化法 |
A．①② B．②③ C．③④ D．②④
