（7分）下图为酵母细胞固定化及其应用的相关图解，请据图回答：
（1）某实验小组利用海藻酸钠制备固定化酵母细胞，应使用图甲中方法〔 〕 （填出号码及名称）。而制备固定化酶则不宜用此方法，原因是 。部分同学实验制得的凝胶珠如图乙，其原因可能有 、 等。
（2）某实验小组用图丙所示的装置来进行葡萄糖发酵。 a 是固定化酵母， b 是反应柱。 从上端漏斗中加入反应液的浓度不能过高的原因是： 。为使该实验中所用到的固定化酵母细胞可以反复利用，实验过程一定要在________条件下进行。装置中的长导管起的作用是 。
（8分）据新华社北京2008年8月11日电 ：由中国农业大学李宁院士领导的研发团队与生物技术有限公司合作，日前在北京转基因动物试验基地成功培育出了一头健康的转人“抗CD20抗体基因”的转基因奶牛——贝贝。抗人CD20单克隆抗体是目前治疗B淋巴细胞瘤等恶性肿瘤的特效药物。该研发团队通过转基因技术获得转基因奶牛乳腺生物反应器，其生产的抗人CD20单克隆抗体表达量显著高于采用哺乳动物细胞系的表达量。
（1）下列各图表示采用哺乳动物细胞系制备单克隆抗体过程的各阶段图解，请据图回答下列问题：
①请用箭头和图中字母表示出单克隆抗体制备的过程： 。
②图B注射的特定抗原是指 抗原，图H中进行克隆化培养和抗体检测呈阳性的细胞是 细胞。
（2）转基因牛贝贝可通过分泌乳汁来生产抗人CD20抗体，在基因表达载体中，人CD20抗体基因的首端必须含有乳腺蛋白基因的____________，它是______________识别和结合点位点。将基因表达载体通过特定技术导入到受精卵，再受精卵移植到母牛的输卵管或子宫内，使其发育成为转基因牛犊。
（3）科学家从某些能无限增殖的细胞的细胞质中分离出无限增殖调控基因（prG），该基因能激发许多动物细胞的分裂，这为单克隆抗体的制备提供了新的途径。有人提出，可以直接通过基因工程制备单克隆抗体，其思路如下图所示。请回答：
形成重组质粒过程中，对核苷酸序列有严格要求的工具酶是 （用图中字母回答）。导入的受体细胞Ⅱ是 ，对导入重组质粒的II进行“检测”的目的是 。
（7分）运用动物体细胞杂交技术可实现基因定位。研究发现：用人的细胞与小鼠体细胞进行杂交得到的杂种细胞含有双方的染色体。杂种细胞在持续分裂过程中仅保留鼠的染色体而人类染色体则逐渐丢失，只剩一条或几条。右图是人的缺乏 HGPRT 酶突变细胞株（ HGPRT - ）和小鼠的缺乏 TK 酶细胞株（ TK-）融合后并在 HAT 培养液中培养的过程，结果表明最终人的染色体在融合细胞中仅存有 3 号染色体或 17 号染色体或两者都有。已知只有同时具有 HGPRT 酶和 TK 酶的融合细胞才可在 HAT 培养液中长期存活与繁殖。
（1）体细胞杂交的优点是 ，过程 ① 常用的生物方法是 。
（2）过程 ② 中，需还要定期用 处理细胞，使贴壁生长的细胞脱落形成细胞悬液。
（3）从培养过程看， HAT 培养液不仅能提供养料，还起 作用。
（4）从图示结果看，可以确定人的 基因位于 号染体；该方法可以对鼠基因定位吗？_______________
（9分）降钙素是一种多肽类激素，临床上用于治疗骨质疏松症等。人的降钙素活性很低，半衰期较短。某科学机构为了研发一种活性高、半衰期长的新型降钙素，从预期新型降钙素的功能出发，推测相应的脱氧核苷酸序列，并人工合成了两条72个碱基的DNA单链，两条链通过18个碱基对形成部分双链DNA片段，再利用Klenow酶补平，获得双链DNA，过程如下图。
在此过程中发现，合成较长的核苷酸单链易产生缺失碱基的现象。分析回答下列问题：
（1）Klenow酶是一种_____酶，它能催化相邻核苷酸的________和_______之间形成_______键；合成的双链DNA中有________个碱基对。
（2）获得的双链DNA经EcoRⅠ（识别序列和切割位点-G↓AATTC-）和BamHⅠ（识别序列和切割位点-G↓GATCC-）双酶切后插入到大肠杆菌质粒中，筛选含重组质粒的大肠杆菌并进行DNA测序验证。
①大肠杆菌是理想的受体细胞，这是因为它____________________________________。
②设计EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切的目的是_______________________________________。
（3）经DNA测序表明，最初获得的多个重组质粒，均未发现完全正确的基因序列，最可能的原因是_________。
（4）上述制备该新型降钙素，运用的现代生物工程技术是____________________。
（6分）下图表示利用胚胎干细胞（ES细胞）所作的一系列研究，请据图分析回答：
（1）过程Ⅰ将胚胎干细胞置于γ射线灭活的鼠胚胎成纤维细胞的饲养层上，并加入动物血清、抗生素等物质，维持细胞不分化的状态。在此过程中，饲养层提供干细胞增殖所需的___________，加入抗生素是为了____________________，这对于研究细胞分化和细胞凋亡的机理具有重要意义。
（2）过程Ⅱ将带有遗传标记的ES细胞注入早期胚胎的囊胚腔，通过组织化学染色，用于研究动物体器官形成的时间、发育过程以及影响的因素，这项研究利用了胚胎干细胞具有______________的特点。在哺乳动物早期发育过程中，囊胚的后一个阶段是_________。
（3）过程Ⅲ中目的基因导入胚胎干细胞最常用的方法是____________________，将目的基因转入胚胎干细胞前需构建基因表达载体，其目的是___________________________________________。
（8分）下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图l、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：
（1）一个图1所示的质粒分子经EcoRⅠ切割后，含有 个游离的磷酸基团。
（2）若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越_____，原因是 。
（3）用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Srna Ⅰ切割，原因是 。
（4）与只使用EcoR I相比较，使用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止 。
（5）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入 酶。重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了 。
（6）为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在 的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。
