Question

图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有Msp Ⅰ、BamH Ⅰ、Mbo Ⅰ、Sma Ⅰ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题：

（1）图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由         连接。

（2）若用限制酶Sma Ⅰ完全切割图1中DNA片段，其产物长度为               。

（3）若图1中虚线方框内的碱基对被T－A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从杂合子分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶Sma Ⅰ完全切割，产物中共有      种不同DNA片段。

（4）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是              。在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加             的培养基进行培养。经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达，其最可能的原因是                                          。

Answer

（每空1分，共6分）

（1）脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖 （2）537bp、790bp、661bp（3）4

（4）BamH I  抗生素B 同种限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D与质粒反向连接

【解析】

试题分析：（1）一条链中的两个碱基是依次由脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖连接。

（2）由题意可知在DNA片段中有2个该酶酶切位点，切割后会产生537bp、790bp、661bp三个片段。

（3）杂合子是Dd,D被酶切为3段，d中只有一个酶切位点，切成2个片段，有一个是与D相同的661片段，故共4种。

（4）酶切时应将目的基因片段完全切下来，而在质粒上只能切开一个缺口，根据题干中信息用BamH I最好，由图2可知该质粒含抗生素B抗性基因故培养基中需添加抗生素B。目的基因不能正确表达的原因可能是同种限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D与质粒反向连接。

考点：本题考查基因工程相关知识，意在考察考生对知识点的理解和信息提取分析能力。