Question

某培养基可用于分离土壤中特定的微生物，成分见表。回答下列问题：

葡萄糖	K2HPO4	K2SO4	NaCl	CaCO3	MgSO4•7H2O	蒸馏水
10g	0.2g	0.2g	0.2g	5g	0.2g	1000mL

（1）该培养基能为微生物提供的营养物质是______。在该培养基和牛肉膏蛋白胨培养基上接种等量稀释的土壤浸出液，若牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数______，则说明该培养基具有选择作用。

（2）获得纯净培养物的关键是______，实验室中常使用______（设备）对培养基灭菌。为了获得单个的菌落并计数，应在该培养基中加入______并采用______法接种。

（3）恰当的稀释度是计数成功的关键，若样品浓度过高，会出现的问题是______。某同学将不同稀释度的菌液均取n毫升，分别接种在多个平面上，进行适宜条件的培养，待菌落数目稳定时记录结果，得到m倍稀释度的三个平板菌落数分别为32、42和52，则每升菌液中的细菌数为______个。

Answer

碳源、水、无机盐 明显更多 防止外来杂菌的污染 高压蒸汽灭菌锅 琼脂 稀释涂布平板 微生物聚集在一起，不能在培养基表面形成单菌落 42000m/n

【解析】

1、微生物培养的培养基根据功能可以分为选择培养基和鉴别培养基两种，该培养基按照功能来分属于选择培养基。培养基中的营养成分主要包括碳源、氮源、水和无机盐等，培养基还需要满足微生物生长对特殊营养物质、酸碱度以及氧气的要求。

2、微生物培养过程中，实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌法。

3、常用的微生物接种的方法有平板划线法和稀释涂布平板法；稀释涂布平板法需要将菌液进行一系列梯度稀释，然后进行涂布平板培养，可形成由单个细胞形成的单个菌落，所以该方法可以用于微生物的纯化培养和计数。

（1）微生物培养基的主要营养物质有碳源、氮源、水和无机盐，有的还需要特殊的营养物质，如：生长因子等。据表分析可知，该培养基缺少氮源，在该培养基和牛肉膏蛋白胨培养基上接种等量稀释的土壤浸出液，牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数较多，说明了该培养基确实有选择作用。

（2）获得微生物纯净培养物的关键是无菌操作，防止杂菌污染，实验室中常用高压蒸汽灭菌锅对培养基进行灭菌。为了获得单个的菌落并计数，应该用稀释涂布平板法在添加了琼脂的固体培养基上进行接种。

（3）若样品浓度过高，进行涂布培养计数时会出现微生物聚集在一起，不能在培养基表面形成单菌落。根据题意，每升水样中的活菌数为（32+42+52）÷n×1000×m=4.2×104mn个。