Question

苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中，对环境有严重危害。小明同学准备依据如图操作步骤，从处理废水的活性污泥中分离筛选酚降解高效菌株。请回答下列问题：

（1）酚降解菌富集培养基含有蛋白胨、K₂HPO₄、MgSO₄、苯酚和水，其中可作为碳源的有________。

（2）将采集到的样品接种培养，苯酚用量应随转接次数增加而逐渐________，以达到富集酚降解菌的目的；若如图平板中菌落过于密集，应进一步________，以便于菌落计数与分离；制备平板培养基时除了需要水、营养物质外，还必须添加________。

（3）如图为连续划线法示意图，在图中________（填图中序号）区域更易获得单菌落。

（4）若选择培养的是纤维素分解菌，为确定得到的是纤维素分解菌，还需要进行________的实验，测定其分解滤纸等纤维素后所产生的________进行定量测定。

Answer

蛋白胨、苯酚 增加 梯度稀释（稀释涂布） 凝固剂（琼脂） ③ （发酵）产纤维素酶 葡萄糖

【解析】

平板划线法时将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养，在划线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。为确定得到的微生物是纤维素分解菌，还需进行发酵产纤维素酶的实验，纤维素酶的发酵方法有液体发酵和固体发酵两种，纤维素酶的测定方法，一般是对纤维素酶分解滤纸等纤继素后所产生的葡萄糖进行定量测定。

（1）酚降解菌富集培养基含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水，其中可作为碳源的有蛋白胨、苯酚。

（2）分析实验可知，实验目的是筛选酚降解菌，因此将采集到的样品接种培养，苯酚用量应随转接次数增加而逐渐增加，以达到富集酚降解菌的目的；若图1平板中菌落过于密集，应进一步稀释涂布，以便于菌落计数与分离；平板培养基属于固体培养基，该培养基需要加入琼脂作为凝固剂。

（3）图2为平板划线法，随着划线次数的增加，菌种进一步被稀释，因此图中③区域更易获得单菌落。

（4）若选择培养的是纤维素分解菌，为确定得到的是纤维素分解菌，还需要进行发酵产纤维素酶的实验，对其分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖进行定量测定。