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下表列出了几种限制酶识别序列及其切割位点,图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位...

下表列出了几种限制酶识别序列及其切割位点,图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题:

(1)一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后,分别含有____个游离的磷酸基团。

(2)若对图中质粒进行改造,插入的SmaⅠ酶切位点越多,质粒的热稳定性越____

(3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒,不能使用SmaⅠ切割,原因是______________________________________

(4)与只使用EcoRⅠ相比较,使用BamHⅠ和HindⅢ2种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止___________________________________

(5)为了获取重组质粒,将切割后的质粒与目的基因片段混合,并加入____酶。

 

0、2 高 SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因和外源DNA中的目的基因 质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化 DNA连接 【解析】 限制性核酸内切酶的作用特点 (1)限制性核酸内切酶所识别的DNA序列,无论是6个碱基还是4、5、8个碱基,都可以找到一条中心轴线,中心轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。 (2)若限制性核酸内切酶在识别序列的中心轴线的两侧分别切割,则得到黏性末端,若限制性核酸内切酶在识别序列的中心轴线处进行切割,则得到平末端。 (1)质粒分子是环状的DNA分子,没有切割之前不含游离的磷酸基团;经SmaⅠ切割后,形成2个末端,含有2个游离的磷酸基团。 (2)C和G之间含有3个氢键,A和T之间含有2个氢键,所以C和G含量越多,DNA分子热稳定性越高。SmaⅠ酶的识别序列的C和G含量较高,所以对图中质粒进行改造时,插入的SmaⅠ酶切位点越多,质粒的热稳定性越高。 (3)因为质粒的抗性基因和外源DNA中的目的基因都含有SmaⅠ的切割位点,用SmaⅠ会破质粒的抗性基因和外源DNA中的目的基因,所以 图中的质粒和外源 DNA构建重组质粒,不能使用SmaⅠ切割。 (4) 与只使用EcoRⅠ相比较,使用BamHⅠ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA,由于目的基因的两端的黏性末端不同,优点在于可以防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化。 (5)用DNA连接酶连接切割后的质粒与目的基因片段可以获取重组质粒。
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考点分析:
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干扰素是动物体内合成的一种蛋白质,可以用于治疗病毒感染和癌症,但体外保存相当困难,如果将其分子上的一个半胱氨酸变成丝氨酸,就可在-70 ℃下保存半年,给广大患者带来福音。

(1)蛋白质的合成是受基因控制的,因此获得能够控制合成“可以保存的干扰素”的基因是生产的关键,依据蛋白质工程原理,设计实验流程,让动物生产“可以保存的干扰素”(请填写)。

预期蛋白质的功能――→设计_____________――→推测______________――→合成______________。     

(2)基因工程和蛋白质工程相比较,基因工程在原则上只能生产____________的蛋白质,不一定符合人类生产和生活的需要。而蛋白质工程是以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础,通过____________________________,对现有蛋白质进行_____________,或制造一种新的蛋白质,以满足人类的生产和生活需要。

(3)蛋白质工程实施的难度很大,原因是蛋白质具有十分复杂的_____________结构。

(4)对天然蛋白质进行改造,应该直接对蛋白质分子进行操作,还是通过对基因的操作来实现?_____________________________ 。原因是_______________________________________

 

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下图是基因工程示意图,请据图回答:

(1)从基因文库中提取的目的基因通过PCR进行扩增时,需使用一种特殊的酶是__________________

(2)进行过程①时,需用_____________酶切开载体以插入目的基因.载体应有RNA聚合酶识别和结合的部位,以驱动目的基因转录,该部位称为______________ 

(3)构建基因表达载体的目的是使___________________________

(4)若用重组质粒转入大肠杆菌,一般情况下,不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞,原因是_____________

(5)在抗虫作物的培育过程中,将Bt毒蛋白基因导入作物受体细胞时,常用的方法是_____________

(6)检测细菌的目的基因是否转录出mRNA时,需要用______________做探针,再与相应的物质杂交。

 

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为实现目的基因与运载体结合,以便在大肠杆菌中大量表达相应的蛋白质,研究人员进行了如图所示操作.请分析回答下列问题:

(1)图表示用Bam H I切割含目的基因的_____________,质粒经相同限制酶处理后,经_____________ 酶的作用获得a,a称作_____________.将a与感受态大肠杆菌混合后,混合物应接种在含有________的培养基上.质粒中抗氨苄青霉素基因称为_____________ ,在筛选过程起作用.若要证明培养基是否符合实验要求,培养基上需接种_____________ 的感受态大肠杆菌,培养后不出现菌落则培养基合格。

(2)DNA分子中,一条链中的两个核苷酸通过_____________相连,已知碱性磷酸酶能除去核苷酸末端的5’磷酸,构建a的过程中用该酶处理质粒,但目的基因不用碱性磷酸酶处理,这样做的目的是__________________________. 如果要检测目的基因 是否成功表达,须提取培养后大肠杆菌的______________ , 用相应_____________________检测。

 

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蛋白质工程目前成功的是(  )

A. 对胰岛素进行改造,生产速效型药品

B. 蛋白质工程应用于微电子方面

C. 体外耐保存的干扰素

D. 用蛋白质工程生产赖氨酸玉米

 

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下列关于蛋白质工程和基因工程的比较,不合理的是(  )

A. 基因工程原则上只能生产自然界已存在的蛋白质,而蛋白质工程可以对现有蛋白质进行改造,从而制造一种新的蛋白质

B. 蛋白质工程是在基因工程的基础上发展起来的,蛋白质工程最终还是要通过基因修饰或基因合成来完成

C. 当得到可以在-70 ℃条件下保存半年的干扰素后,在相关酶、氨基酸和适宜的温度、pH条件下,干扰素可以大量自我合成

D. 基因工程和蛋白质工程产生的变异都是可遗传的

 

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