Question

回答下列有关动物细胞培养的问题：

⑴在动物细胞培养的过程中，当贴壁细胞分裂生长到细胞表面________________时，细胞会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的_________。此时，瓶壁上形成的细胞层数是____，要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来，需要用酶处理，可用的酶是________。

⑵随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞分裂停止，进而出现_________的现象；但极少数细胞可以连续增殖，朝着等同于癌细胞的方向发展，获得_________性，并且遗传物质发生改变，该种细胞的黏着性_________，细胞膜表面蛋白质（糖蛋白）的量_________。

⑶现用某种大分子染料，对细胞进行染色时，观察到死细胞被染色，而活细胞不染色，原因是_____________________________。

⑷检查某种毒物是否能改变细胞染色体的数目，最好选用分裂到____期的细胞用显微镜进行观察。

⑸在细胞培养过程中，通常在____条件下保存细胞，因为在这种条件下，细胞中_____的活性降低，细胞的新陈代谢速率降低。

⑹根据细胞在培养皿或培养瓶上的生长特征，要求培养皿或培养瓶的内表面光滑、_________、易于_________。动物细胞培养时，培养基中要加入的营养成分与植物不同的是_______________等。

Answer

相互接触 接触抑制 单层（或一层） 胰蛋白酶 衰老甚至死亡 不死性 降低 减少 由于活细胞的膜具有选择透过性，大分子染料不能进入活细胞内，故活细胞不能着色（或由于死细胞的膜丧失了选择透过性，大分子染料能够进入死细胞内而着色） 中 冷冻（或超低温、液氮） 酶 无毒 贴附 动物血清、血浆

【解析】

据题文描述可知：本题考查学生对动物细胞培养技术等相关知识的识记和理解能力。

(1) 动物细胞培养时，制备的细胞悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，此现象称为细胞的接触抑制。此时，瓶壁上形成的细胞层数是单层。贴满瓶的细胞需要用胰蛋白酶处理，才能使其从瓶壁上分离下来。

(2) 一般来说，细胞在传至10～50代左右时，增殖会逐渐减慢，以至于完全停止，这时绝大部分细胞出现衰老甚至死亡的现象，只有极少数细胞遗传物质发生改变，克服细胞寿命的自然极限，朝着等同于癌细胞的方向发展，获得不死性而得以存活。这些极少数细胞的黏着性降低，细胞膜表面蛋白质（糖蛋白）的量减少。

(3) 由于活细胞的膜具有选择透过性，大分子染料不能进入活细胞内，因此活细胞不能被染色；当细胞死亡后，膜丧失了选择透过性，大分子染料能进入细胞内，所以死细胞能被染色。

(4) 因处于有丝分裂中期细胞内的染色体形态比较稳定，数目比较清晰，是观察辨认染色体的最佳时期，所以检查某种毒物是否能改变细胞染色体的数目时，最好选用分裂到中期的细胞用显微镜进行观察。

(5) 因为在冷冻（或超低温、液氮）条件下，细胞的新陈代谢速率因其中酶的活性降低而降低，所以在细胞培养过程中，通常在冷冻（或超低温、液氮）条件下保存细胞。

(6) 在动物细胞培养过程中，细胞的分裂和生长是贴附在瓶壁上进行的，所以要求培养皿或培养瓶的内表面光滑、无毒、易于贴附。由于人们对动物细胞所需的营养物质还没有完全搞清楚，因此用于培养动物细胞的合成培养基中，除了加入水、无机盐、维生素、葡萄糖、氨基酸等必需的营养成分外，往往要加入一些动物血清、血浆等天然成分；植物组织培养的培养基中不添加动物血清、血浆等成分。