Question

由腊梅凝集素基因控制合成的某种蛋白质能与蚜虫肠道黏膜上的受体结合，从而抑制蚜虫吸收营养物质。通过基因工程将腊梅凝集素基因转入烟草，可增强其抗蚜虫的能力。请回答下列问题：

（1）在逆转录酶的作用下，能以腊梅凝集素基因产生的mRNA作为模板按照______原则获得cDNA片段，以获取目的基因。

（2）将目的基因导人烟草细胞常用的方法是农杆菌转化法。农杆菌的Ti质粒上的T-DNA具有______的特点。在该过程中需要添加酚类物质，目的是______。筛选成功导人目的基因的烟草细胞，再通过______技术获得转基因烟草幼苗。

（3）将转基因烟草幼苗与非转基因烟草幼苗隔区种植，并接种等量的蚜虫，一定时间后用______法统计蚜虫的种群密度，若______，则说明转基因烟草具有抗蚜虫能力。

（4）上述方法获得的转基因烟草，抗虫基因可能会随______（填“花粉”或“卵细胞”）扩散传播，产生基因污染，故可以通过基因枪法将______打人烟草细胞叶绿体以 实现转化。提高转基因烟草的安全性。

Answer

碱基互补配对 可转移至受体细胞并且能整合到烟草细胞中染色体的DNA上 吸引农杆菌感染烟草细胞 植物组织培养 样方 转基因烟草幼苗区内的蚜虫密度低于非转基因烟草幼苗区 花粉 抗虫基因表达载体

【解析】

基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（1）在逆转录酶的作用下，能以腊梅凝集素基因产生的mRNA作为模板按照碱基互补配对原则获得cDNA片段，以获取目的基因。

（2）农杆菌的Ti质粒上的T-DNA具有可转移至受体细胞并且能整合到烟草细胞中染色体的DNA上的特点。在该过程中需要添加酚类物质，目的是吸引农杆菌感染烟草细胞。筛选成功导人目的基因的烟草细胞，再通过植物组织培养。

（3）将转基因烟草幼苗与非转基因烟草幼苗隔区种植，并接种等量的蚜虫，一定时间后用样方法统计蚜虫的种群密度，若转基因烟草幼苗区内的蚜虫密度低于非转基因烟草幼苗区，则说明转基因烟草具有抗蚜虫能力。

（4）上述方法获得的转基因烟草，抗虫基因可能会随花粉扩散传播，产生基因污染，故可以通过基因枪法将抗虫基因表达载体打人烟草细胞叶绿体以实现转化，提高转基因烟草的安全性。