Question

土壤中含有大量的难溶性磷酸盐，为了从土壤中筛选出能够将难溶性磷酸盐转化为植物能吸收的可溶性磷的优良解磷菌株，以便将其添加到有机肥中，改善植物磷元素供应，科研人员进行如下实验：

实验原理：固体培养基中难溶性磷酸盐在微生物的作用下溶解，会在菌落周围形成透明圈（如图1），透明圈直径（D）与菌落直径（d）的比值（D/d）代表微生物溶解磷的能力大小。

实验步骤:

步骤1 取某地区土样5g制得土壤溶液后稀释，取稀释液lmL接种到基础培养基A上，在适宜温度下培养72h。

步骤2 在基础培养基A上用接种环挑取代表性菌落再次接种，培养3〜4d后观察菌落特征和透明圈的大小，初步筛选出三种优良解磷菌株（如表）。

菌株	透明圈直径（D）	菌落直径（d）	D/d
M-3-01	18.8	12.3	1.5
B3-5-6	20.7	8.0	2.6
T1-4-01	9. 1	6.5	1.4

请据以上资料，回答下列问题：

（1）从物理形态上看，培养基A属于_________培养基，为了筛选出优良解磷菌株，培养基中加入的磷源是_________。

（2）步骤1中的接种方法是_________，应该在_________旁完成操作。步骤2中对接种环采用的灭菌方法是_________灭菌。

（3）根据表中的实验结果可以确定溶解磷能力最强的菌株是_________。

（4）为进一步测定初步筛选的三种菌株实际溶解磷的能力，研究人员将它们接种到基础培养基B中，并在37℃、200r·min^-l摇床培养，定期取上清液，测定溶液中可溶性磷含量，得到如图2所示曲线。

①用摇床进行振荡培养的好处之一是增加培养液中的_________。

②图2所示曲线结果表明最优良的解磷菌株是_________。

Answer

固体难溶性磷酸盐稀释涂布平板法酒精灯火焰灼烧B3﹣5﹣6溶氧量（氧气含量）M﹣3﹣01

【解析】

土壤是微生物的天然培养基。从土壤中筛选出能够将难溶性磷酸盐转化为植物能吸收的可溶性磷的优良解磷菌株必须使用以难溶性磷酸盐作为唯一磷源的选择培养基。表格中的透明圈越大，菌落直径越小，说明降解难溶性磷酸盐的能量越强。据此分析作答。

（1）菌落必需在固体培养基上才能形成（培养过程中菌体不能运动）；要筛选溶解难溶性磷能力强的菌株，必须以难溶性磷酸盐作为唯一磷源。

（2）步骤1的目的是从土壤微生物中筛选解磷微生物，由于土壤样液中微生物种类和数量多，因此，最好采用稀释涂布平板法进行接种，为了避免杂菌污染，应该在酒精灯火焰旁完成操作，接种环灭菌方法是灼烧灭菌。

（3）根据实验原理中“透明圈直径与菌落直径比代表微生物溶解磷的能力大小”，结合表格数据可以确定解磷能力最强的菌株是B3-5-6。

（4）①摇床培养是实验室培养需氧微生物的常用方法，使用摇床培养，不仅可以增大培养液中溶氧量，促进微生物的有机呼吸，而且能够增加菌体与培养液的接触，提高营养物质的利用率。

②根据实验曲线图，不难看出M-3-01实际溶解磷能力最强。