Question

用基因工程技术将乙肝病毒的蛋白A基因导入酵母菌细胞，可以大规模的生产乙肝疫苗，请回答下列相关问题：

（1）利用PCR技术扩增蛋白A基因时，需要在一定的缓冲溶液中进行，目的是____________________。反应体系中除了含有蛋白A基因、脱氧核苷酸、耐热的DNA聚合酶、还必须含有分別与两条模板链相结含的____________。

（2）大规模培养工程酵母菌时，培养液中需含有水、无机盐、碳源、氮源等营养物质，培养过程中还需通入无菌空气，目的是_______________________。

（3）利用凝胶色谱法从工程酵母菌中分离蛋白A时，凝胶色谱柱装填完毕后需立即连接缓冲液洗脱瓶，一段时间后加入蛋白A粗提样品进行洗脱。立即连接缓冲液洗脱瓶的目的是____________，若蛋白A的分子量较小，则洗脱时间相对____________（较短、较长）。

（4）以乙肝病毒蛋白A作为疫苗给人注射时，必须分多次进行，两次注射之间必须间隔一定的时间，目的是让人体____________；通过注射该疫苗无法预防流感病毒，原因是________________________。

Answer

保持（耐热DNA聚合）酶的活性 两种引物 保证酵母菌的有氧呼吸和大量繁殖 洗涤平衡凝胶，使凝胶装填紧密 较长 通过二次免疫产生更多的抗体 乙肝病毒A的抗体不能识别、清除流感病毒

【解析】本题考查基因工程、微生物培养、蛋白质的分离和免疫预防等知识点，解题要点是识记各种生物技术相关的原理和方法。

（1）利用PCR技术扩增目的基因的条件：模板DNA（含有蛋白A基因）、原料（四种脱氧核苷酸）、2种引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶）。因为反应过程中需要酶保持较强的活性，所以需要在一定的缓冲溶液中进行。

（2）酵母菌进行有氧呼吸时分解有机物释放能量多，可以大量繁殖，所以在大规模培养工程酵母菌时，培养液中需含有水、无机盐、碳源、氮源等营养物质，培养过程中还需通入无菌空气。

（3）凝胶色谱柱装填完毕后需立即连接缓冲液洗脱瓶，充分洗涤平衡凝胶12h，使凝胶装填紧密。样品洗脱过程中，分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢，洗脱时间长。

（4）以乙肝病毒蛋白A作为疫苗给人注射时，人体会产生针对乙肝病毒的特异性免疫反应，而疫苗必须分多次进行，两次注射之间必须间隔一定的时间，目的是让人体通过二次免疫产生更多的抗体，以增强人体的免疫力。由于乙肝病毒蛋白和流感病毒蛋白是不同的抗原，所以乙肝病毒A的抗体不能识别、清除流感病毒，故注射乙肝病毒疫苗无法预防流感病毒。

[点睛]：本题考查现代生物技术相关原理和方法，解题关键是识记教材的基础知识，理解相关生物技术的原理，理解操作过程的注意事项，分清易错、易混点：如由于PCR操作中需要酶的催化，所以要在缓冲液中进行以维持酶的活性；用凝胶色谱法分离蛋白质时，如果凝胶装填得不够紧密、均匀，就会在色谱柱内形成无效的空隙，使本该进入凝胶内部的样品分子从这些空隙中通过，搅乱洗脱液的流动次序，影响分离的效果，所以凝胶色谱柱装填完毕后需立即连接缓冲液洗脱瓶，充分洗涤平衡凝胶，使凝胶装填紧密。