Question

常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖来进行酒精发酵，自然界中某些酵母菌能分解木糖产生酒精，科学家欲从果园的葡萄上或土壤中分离这种酵母菌，操作如下：

（1）制备酵母菌培养基要进行倒平板操作，待平板冷凝后，要将平板倒置，其主要原因是__________。获得纯净培养物的关键是____________________。

（2）纯化菌株的过程中，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线，这样做的目的是__________。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二划线区域的第一条线上无菌落，其它划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误是____________________。

（3）若要检测土样中的酵母菌数量，应采用__________法接种。在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板培养基先行培养了一段时间，这样做的目的是____________________。然后，将1mL 土壤溶液分别稀释10倍和100倍，每种稀释度各3个平板，分别接入0.1mL稀释液，经适当培养后，6个平板上的菌落数分别为59、57、58、2、7和5，据此可得出每升土壤溶液中的活菌数为__________个。

Answer

防止培养皿盖的冷凝水落入培养基造成污染 防止外来杂菌入侵 将聚集的菌体逐步分散以获得单个菌落 接种环灼烧后未冷却或划线未从第一区域末端开始 稀释涂布平板 检测培养基灭菌是否合格 5.8×106

【解析】【试题分析】本题考查了培养基的制备和微生物培养的有关知识。从土壤中分离微生物的一般步骤是：土壤取样、选择培养、梯度稀释、涂布培养和筛选菌株；常用的接种方法主要有稀释涂布平板法和平板划线法。

（1）倒平板前有一个加热过程，平板冷凝时，空气中水蒸气冷凝到培养皿盖上，里面可能有杂菌，倒置的话，冷凝的水不会流到培养基里面去，防止杂菌落到培养基上；获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌入；

（2）二次划线时要从上一次划线的末端开始划线，因划线后线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，这样最终就能得到由单个细菌繁殖而来的菌落；接种时常用接种环，平板划线法要求灼热的接种环冷却后再划线，否则会灼伤菌株甚至死亡，造成划线无菌落，或者划线未从第一区域末端开始，也会造成划线无菌落；

（3）稀释涂布平板法常常用来进行微生物的分离和计数；为检验培养基平板灭菌是否合格，需要在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板培养基先行培养了一段时间，观察有无菌落形成，若没有菌落形成则表明培养基灭菌合格，否则不合格；稀释涂布平板法中，一般选用30～300个菌落数进行计数，因此采用稀释10倍和菌落数分别为59、57、58的进行计算，据此可得出每升土壤溶液中的活菌数为=（59+57+58）÷3×10÷（0.1×10-3）=5.8×106个。