Question

我国目前临床使用的乙肝疫苗大多为基因工程疫苗，其有效成分是一种叫做乙肝表面抗原的蛋白质（S蛋白），对应的基因为s基因。请回答：

（1）在构建重组DNA分子时，要用限制性核酸内切酶处理_________，并用_________酶使两者结合。将重组DNA分子导入到哺乳动物细胞，经筛选得到工程细胞。

（2）在细胞培养过程中，工程细胞在生长过程中有_________现象，需要定期使用_________酶处理，以便于分瓶培养。

（3）为提髙工程细胞培养的成功率，下列措施中不幸采用的是（_____）

A.取单个细胞进行培养       B.加入胰岛素      C.二氧化碳培养箱           D.加入动物血清

（4）由于哺乳动物细胞培养较难，成本较高，近些年科学家们又发明了“乳腺生物发生器”，进而从转基因动物的乳汁中提取所需产品。在这种技术中，作为重组DNA分子受体细胞的一般是__________________。

Answer

s基因和载体DNA DNA连接 接触抑制 胰蛋白 A 受精卵

【解析】试题分析：基因工程的一般操作步骤有：目的基因的获取、基因表达载体的构建、目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与表达。动物细胞培养的过程：取动物组织块→剪碎组织→用胰蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养液中（原代培养）→放入二氧化碳培养箱培养→贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞，制成细胞悬液→转入培养液（传代培养）→放入二氧化碳培养箱培养。

（1）在构建重组DNA分子时，要用限制性核酸内切酶处理s基因和载体DNA，并用DNA连接酶将两者连接起来。

（2）在动物细胞培养过程中存在接触抑制现象，需要定期使用胰蛋白酶处理，以便于分瓶培养。

（3）取单个细胞进行培养不会提髙工程细胞培养的成功率，A错误；胰岛素能促进血糖进入组织细胞，因此提髙工程细胞培养的成功率，应该在培养基添加胰岛素，B正确；动物细胞培养时需要一定的气体环境，因此需要放在二氧化碳培养箱，C正确；动物细胞培养时，为了给细胞提供充足的营养，需要在培养基中加入动物血清，D正确。

（4）培育转基因动物时，应该以受精卵作为受体细胞，因为受精卵的全能性最高。