Question

【生物选修1-生物技术实践】多氯联苯是一种对人体有很大危害的有机物质，呈油状液体，污染土壤后，很难清除。研究发现部分酵母菌具有分解多氯联苯的作用，为消除这种污染，科研人员计划从受污染的土壤中筛选出高效分解多氯联苯的菌株。

（1）培养基中加入多氯联苯作为______________，从功能上讲该培养基属于_____________。

（2）上述培养基的灭菌方法是______________；筛选分解多氯联苯的菌株时，应将土壤样品________。

（3）对初步提取到的菌株要进行_______________，一般操作方法有两种，下图是________法。

（4）将酵母菌溶液分别稀释10、100、1000倍，每个浓度都接种3个平板，每个平板均接入0.1ml稀释液。经适当培养后，平板上的菌落数如下表所示：

据此可得出每升溶液中酵母菌活菌数为_________个/L。

Answer

唯一碳源 选择培养基 高压蒸汽灭菌法 稀释（溶解） 纯化 稀释涂布平板法 4.6×107

【解析】（1）为了从土壤中分离筛选能分解多氯联苯的酵母菌，需要用只含多氯联苯作为唯一碳源的培养基，以保留能分解利用多氯联苯的酵母菌，而淘汰不能利用多氯联苯的微生物。

（2）对培养基灭菌最好用高压蒸汽灭菌法灭菌。筛选分解多氯联苯的菌株时，应将土壤样品稀释后再接种到选择培养基上。

（3）由于初步提取到的菌株中可能含有大量的杂菌，所以要进行纯化培养，一般操作方法有两种，一种是稀释涂布平板法，一种是平板划线法。题中图示为稀释涂布平板法。

（4）活菌计数法的原理是当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了增强实验的说服力与准确性，同时为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。所以根据表中统计的菌落数，只有稀释100倍的统计结果符合要求，计算1L培养液中酵母菌数为（47+50+41）÷3÷0.1×100×1000个=4.6×107个。

【点睛】正确理解“选择菌落在30～300的平板”计数

(1)只得到1个菌落数在30～300的平板是错误的。原因是不符合实验的重复原则,易受到偶然因素的影响。

(2)并不是只要得到3个“菌落数在30～300的平板”即可，而应该是涂布的同一稀释度的平板符合“菌落数在30～300的平板”且无较大差异，才能按照计算公式进行计算，如得到3个平板菌落数分别为230、30、240，虽然菌落数均在“30～300”之间，但“30”与“230”“240”差异太大，应重新实验找出原因。