Question

［生物—选修3现代生物科技专题

人的内皮抑素（一种蛋白质）能诱导血管内皮细胞凋亡，进而抑制新血管的产生。临床上通过静脉注射含有内皮抑素基因的腺病毒感染肿瘤细胞，使肿瘤细胞产生并释放内皮抑素，抑制新生血管的形成，使肿瘤细胞进人休眠状态并诱导其凋亡。回答下列问题：

（1）从肝细胞中提取总mRNA,利用逆转录酶合成        ，根据内皮抑素基因的          设计并合成引物，利用PCR技术得到大量内皮抑素基因。

（2）在构建含内皮抑素基因的腺病毒并导人受体细胞的过程中，以          作为工具酶，以            作为载体。

（3）在进入临床使用前，需用体外培养的血管内皮细胞进行生理、病理检测。为获得大量的血管内皮细胞，首先用         酶处理血管内皮组织，使其分散成单个细胞，制成细胞悬液，然后将其放人含     等一些天然成分的合成培养基中培养。

（4）血管内皮细胞被重组腺病毒感染后，若通过          方法检测呈阳性并观察到细胞凋亡，则说明内皮抑素基因得到表达且具有生物学活性。

（5）临床上将含内皮抑素基因的腺病毒通过静脉注射感染肿瘤细胞，使肿瘤生长受到抑制，这种治疗方法属于          （填“体内”或“体外”）基因治疗。

Answer

（1）cDNA（或DNA）（1分）；核苷酸序列（或序列、碱基序列、碱基对序列或脱氧核昔酸序列）

（2）限制酶（或限制性核酸内切酶）和DNA连接酶（写对一个给1分）；腺病毒

（3）胰蛋白（或胶原蛋白）；血清、血浆（写出一个即可得分）

（4）抗原一抗体杂交

（5）体内

【解析】

（1）提取的mRNA经过逆转录后可以合成DNA或cDNA。合成引物是根据基因的脱氧核苷酸的序列来进行合成的。

（2）构建基因表达载体要用到的工具酶是限制酶和DNA连接酶，用限制酶对目的基因和运载体进行切割，用DNA连接酶进行连接。此表达载体中的运载体是腺病毒。

（3）要将动物细胞分散成单个细胞可以用胰蛋白酶或胶原蛋白酶。动物细胞培养时除了添加必要的营养物质外还需要添加一些天然的成分，如血浆或血清。

（4）要检测基因已经表达应采用抗原-抗体杂交的方法。

（5）将含内皮抑素基因的腺病毒通过静脉注射感染肿瘤细胞，使肿瘤生长受到抑制，这种治疗方法属于体内治疗。

考点：本题考查基因工程相关知识，意在考察考生对知识点的识记理解掌握程度。

【名师点睛】

易错警示：规避与基因工程操作有关的7个失分点

（1）目的基因的插入位点不是随意的：基因表达需要启动子与终止子的调控，所以目的基因应插入到启动子与终止子之间的部位。

（2）基因工程操作过程中只有第三步（将目的基因导入受体细胞）没有碱基互补配对现象。

（3）原核生物作为受体细胞的优点：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少。

（4）转化的实质是目的基因整合到受体细胞染色体基因组中。

（5）一般情况下，用同一种限制酶切割质粒和含有目的基因的片段，但有时可用两种限制酶分别切割质粒和目的基因，这样可避免质粒和质粒之间、目的基因和目的基因之间的

连接。

（6）不熟悉标记基因的种类和作用：标记基因的作用——筛选、检测目的基因是否导入受体细胞，常见的有抗生素抗性基因、发光基因（表达产物为带颜色的物质）等。

（7）还应注意的问题有：①基因表达载体中，启动子（DNA片段）≠起始密码子（RNA）；终止子（DNA片段）≠终止密码子（RNA）。②基因表达载体的构建是最核心、最关键的一步，在体外进行。