Question

（2015•泰州三模）科学家利用基因工程技术将鱼的抗冻蛋白基因导入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高．在培育转基因番茄的过程中，下列操作不合理的是（  ）

A．可用PCR技术或逆转录法获得抗冻蛋白基因

B．将抗冻蛋白基因与相应载体连接构建基因表达载体

C．利用农杆菌转化法将基因表达载体导入番茄体细胞

D．在低温条件下筛选已导入抗冻蛋白基因的番茄细胞

Answer

D

【解析】

试题分析：基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因﹣﹣DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA﹣﹣分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质﹣﹣抗原﹣抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

【解析】
A、获取目的基因的方法包括：从基因文库中获取、采用PCR技术体外扩增、人工化学合成（如逆转录法），A正确；

B、在培育转基因番茄的过程中，需要将抗冻蛋白基因与相应载体连接构建基因表达载体，再导入受体细胞，B正确；

C、将目的基因导入植物细胞最常用的方法是农杆菌转化法，C正确；

D、利用标记基因来自筛选已导入抗冻蛋白基因的番茄细胞，由于该基因在受体番茄细胞中还没有表达，因此不能在低温条件下筛选已导入抗冻蛋白基因的番茄细胞，D错误．

故选：D．

考点：基因工程的原理及技术．