Question

回答下列（一）（二）小题。

（一） 为了调查某河流的水质状况，某研究小组利用全营养固体培养基分离出部分微生物，如图所示。

 

回答下列问题：

（1）据图可知该小组采用________________方法分 离出了水中的微生物。为了防止污染，需要在酒精灯________________旁进行接种。

（2）为鉴定图中微生物的种类，可观察菌落的________________等特征（至少写出两点）。若要对培养基中的某一菌种进行保存，可用接种环挑取并用________________方法接种在________________培养基上。

（3）如图的结果是5mL水样稀释10⁴倍后取0．1mL稀释液培养获得，菌落数为33，同样操作的另外两个平板．上的菌落数分别为35和37．据此可估算出每升水样中的活菌数为___________。 若改用PIDA培养基（马铃薯、葡萄糖、琼胎、蒸馏水）分离出的微生物，会比实际的偏________________（ “少”或“多”），原因是________________。

（二）人血清白蛋白（HSA）有重要的医用价值，只能从人血浆中制备．下图是以基因工程技术获取重组HSA（rHSA）的一条途径。

 

（1）为获取HSA基因，首先需采集人的血液，提取________________逆转录合成相应的 DNA，然后以此为模板，采用________________技术扩增目的基因，获得的目的基因与人体细胞中的HSA基因的碱基序列________________（“相同”或“不同”）。

（2）过程①需要用_____作为载体与HSA基因连接形成重组质粒，然后导入经________________处理过的农杆菌．过程②后的水稻受体细胞转移到含抗生素的培养基上培养，其目的是________________。过程③中的水稻受体细胞经过______形成愈伤组织，再经诱导可以形成芽和根的____________， 并由此再生出新的植株。

Answer

涂布分离法 火焰 大小、形状、边缘、表面、质地、颜色 划线法 斜面 3．5×109 少 细菌喜荤，霉菌喜素，该培养基不适合细菌生长 mRNA PCR 不同 Ti质粒 CaCl2 筛选成功导入目的基因的受体细胞 脱分化 胚状体

【解析】

（1）微生物常见的接种的方法：1、平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。2、稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。（2）分析题图：图中①表示构建基因表达载体和将目的基因导入农杆菌，②表示采用农杆菌转化法将目的基因导入水稻受体细胞，③表示获取目的基因产物。

（一）（1）据图可知该小组采用稀释涂布平板分离方法分离出了水中的微生物。为了防止污染，需要在酒精灯火焰旁进行接种，以保证在无菌环境中进行操作，避免染菌。

（2）为鉴定图中微生物的种类，可观察菌落的大小、形状、边缘、表面、质地、颜色等特征。若要对培养基中的某一菌种进行保存，可用接种环挑取并用划线法的方法接种在斜面培养基上。斜面菌种保存法是最简便、最普遍的保存方法，是将菌种接种到适宜的斜面培养基上培养成熟后，移入适宜的低温下保存，并每隔一段时间转管1次。

（3）每克样品中的菌株数=（c÷V）×M，其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数为35，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积0.1（mL），M代表稀释倍数104，故推测富集培养后的菌液中每升含细菌数为（35÷0.1）×104×1000=3.5×109，若改用PDA培养基（马铃薯、葡萄糖、琼脂、蒸馏水）分离出的微生物，会比实际的偏少，原因是细菌喜荤，霉菌喜素，该培养基不适合细菌生长。

（二）（1）cDNA是以mRNA为模板逆转录形成的；扩增目的基因可采用PCR技术；经过逆转录过程获得目的基因不含启动子、内含子等，因此与人体细胞中的HSA基因的碱基序列不同。

（2）右图可知将目的基因导入植物细胞采用的是农杆菌转化法，因此过程①需要用Ti质粒作为载体与HSA基因连接形成重组质粒；将目的基因导入微生物细胞时，需要用钙离子处理微生物细胞，使之成为感受态细胞；过程②后的水稻受体细胞转移到含抗生素的培养基上培养，其目的是筛选成功导入目的基因的受体细胞；过程③中的水稻受体细胞经过脱分化形成愈伤组织，再经诱导可以形成芽和根的胚状体，并由此再生出新的植株。