Question

某种产脂肪酶菌常被用作饲料添加剂，下表是从土壤中初筛该菌的培养基配方，请回答下列问题：

（NH4）2SO4	NaCl	MgSO4·7H2O	K2HPO4	1％橄榄油	蒸馏水	pH
0.1g	0.05g	0.01g	10g	4mL	定容至 100mL	7.0

（1）在上述培养基中，橄榄油能为产脂肪酶菌提供_________。用该培养基进行选择培养的目的是_____。在选择培养过程中，使用摇床振荡效果较好，原因是_____________。

（2）分离产脂肪酶菌时，在上述培养基的基础上，还应加入琼脂和溴甲酚紫（碱性条件下呈紫色，在酸性条件下为黄色）。在平板上产脂肪酶菌菌落的周围会出现黄色圈，原理是_________。筛选时常选择黄色圈直径大的菌落，说明_____。

（3）可用稀释涂布平板法对微生物进行计数，计算得出菌体数目往往比实际的数目低，原因是_________。使用该方法计数时研究人员分别在3个平板上接种稀释倍数为10⁴的滤液各0.1ml，培养一段时间后， 平板上长出菌落数分别为26、234、258，则每1ml样品中的活菌数为_____个。还可用滤膜法对微生物进行计数，如测定饮用水中大肠杆菌的数目，将滤膜放在_________培养基上培养，根据培养基上黑色菌落的数目计算出大肠杆菌的数量。

（4）对培养基灭菌常用的方法是_____。此方法用到下图仪器，图中甲、乙、丙指示的依次是_____。（填序号）

①安全阀、排气阀、压力表

②排气阀、安全阀、压力表

③安全阀、排气阀、温度表

④排气阀、安全阀、温度表

Answer

碳源 增大产脂肪酶菌的浓度 能增加培养液中的溶氧量，并使菌株与培养液充分接触，提高营养物质的利用率 脂肪酶将脂肪水解为甘油和脂肪酸，脂肪酸使溴甲酚紫变为黄色 菌体产脂肪酶能力强（脂肪酶活性高或量多） 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 2.46×107 伊红-美蓝 高压蒸汽灭菌法 ①

【解析】

根据表格分析，该培养基中含有氮源、碳源、水和无机盐，pH为7（中性），其中碳源是橄榄油中的脂肪，为有机碳源。据图分析，图示为高压蒸汽灭菌锅，其中甲是安全阀，乙是排气阀，丙是压力表。

（1）培养基中橄榄油可以为产脂肪酶菌提供碳源；该培养基上产脂肪酶菌可以大量繁殖，进而增加产脂肪酶菌的浓度；在培养过程中，使用摇床振荡能增加培养液中的溶氧量，并使菌株与培养液充分接触，提高营养物质的利用率。

（2）脂肪酶催化脂肪产生脂肪酸和甘油，脂肪酸使溴甲酚紫变为黄色，因此在平板上产脂肪酶菌菌落的周围会出现黄色圈；菌体产脂肪酶能力强，产生的脂肪酶越多，则菌落周围的黄色圈直径越大。

（3）在利用稀释涂布平板法对微生物进行计数时，由于菌落会有重叠现象，即当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，所以计算得出菌体数目往往比实际的数目低。已知3个平板上的菌落数分别是26、234、258，菌液稀释了104倍，体积为0.1ml，菌落计数时应该取30-300的数据，则每 1ml 样品中的活菌数=（234+258）÷2×104÷0.1ml =2.46×107个。还可用滤膜法对微生物进行计数，如测定饮用水中大肠杆菌的数目，将滤膜放在伊红-美蓝培养基上培养，根据培养基上黑色菌落的数目计算出大肠杆菌的数量。

（4）微生物培养基灭菌常用高压蒸汽灭菌法进行灭菌；根据以上分析已知，图中甲是是安全阀，乙是排气阀，丙是压力表，故选①。