Question

根据各类微生物的形态结构特点和新陈代谢类型，利用选择培养基和鉴别培养基，结合显微镜检，以及菌落特征，可以把混杂在一起的大肠杆菌、硝化细菌、乳酸菌、酵母菌、金黄色葡萄球菌、圆褐固氮菌分离开来。下面是分离筛选的方法、步骤，请根据各个步骤的条件，填写空格中的内容。

首先配制一系列不同性质的固体培养基，然后进行高温灭菌。再将上述微生物的混合液分别接种到各种培养基上培养。

(1)用无氮培养基可筛选出________。

(2)用不含有机碳源的选择培养基可筛选出________菌。

(3)酵母菌的筛选需要在常规培养基中另外加入_____________

(4)用加了较高浓度NaCl的培养基可选择出__________，或者根据菌落的颜色呈现________色，将其挑取单独培养。

(5)利用伊红和美蓝培养基培养混合菌，菌落呈____色并带有金属光泽的是_______菌，挑取该菌落单独培养。结合显微镜检和进一步用伊红和美蓝培养基鉴别培养来确定。

(6)在无氧环境下培养混合菌，_________可以生长，加入一定浓度的乳酸，使培养基pH充分降低，可抑制____________的生长，利用菌落特征，结合显微镜检，选取生长优势的菌落，即可分离出________。

Answer

圆褐固氮菌 硝化细菌 某种抗生素，如青霉素 金黄色葡萄球菌 金黄 黑 大肠杆菌 乳酸菌和酵母菌 酵母菌 乳酸菌

【解析】

1、实验室中目的菌株的筛选的原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。如培养基选择分解尿素的微生物的原理为：培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。同理：圆褐固氮菌为自生固氮菌，可用不含氮源的培养基进行筛选。硝化细菌为自养型，可用不含碳源的培养基进行筛选。乳酸菌的耐酸性较强，金黄色葡萄球菌的耐盐性较强，可用相应的培养基对其筛选。

2、也可以利用鉴别培养基对不同菌种根据菌落特征进行区分，并进一步分离纯化。如在含伊红-美蓝的培养基上出现的黑色菌落为大肠杆菌。

（1）在无氮培养基上只有能自生固氮的微生物才能生长，所以利用无氮培养基可筛选出能够固氮的圆褐固氮菌。

（2）在不含有机碳源的培养基上只有自养微生物才能生长，如硝化细菌是化能自养型，所以利用不含有机碳源的选择培养基可筛选出硝化细菌。

（3）由于青霉素能抑制细菌的生长，而对真菌无影响，所以酵母菌的筛选需要在常规培养基中另加入某种抗生素如青霉素。

（4）由于金黄色葡萄球菌能在较高浓度NaCl的培养基生长，所以利用含较高浓度NaCl的培养基可选择出耐盐的金黄色葡萄球菌。或者根据菌落的颜色呈现金黄色，将其挑取单独培养。

（5）由于大肠杆菌在伊红一美蓝培养基上培养时形成的菌落成黑色并带有金属光泽，所以可以利用伊红-美蓝培养基培养混合菌，菌落呈黑色的是大肠杆菌，挑取该菌落单独培养，结合显微镜镜检和进一步用伊红-美蓝鉴别培养基来确定。

（6）在无氧环境下培养混合菌，厌氧和兼性厌氧的菌体可以生长，故上述菌体中厌氧的大肠杆菌、乳酸菌和兼性厌氧的酵母菌能够生长，加入一定浓度的乳酸，使培养基pH充分降低，可抑制酵母菌的生长，利用菌落特征，结合显微镜镜检，选取生长优势的菌落，即可分离出乳酸菌。