Question

尿素是一种重要的农业肥料，经微生物分解后能更好的被植物利用．某生物兴趣小组试图探究土壤中微生物对尿素是否有分解作用，设计实验并成功筛选到能高效分解尿素的细菌（目的菌）．培养基成分如下表所示．

KH2PO4	NaHPO4	MgSO4•7H2O	葡萄糖	尿素	琼脂
1.4g	2.1g	0.2g	10g	lg	15g

将表中物质溶解后，用蒸馏水定容到100mL．实验过程如图所示：

回答下列问题：

（1）该培养基能筛选出目的菌的原因是______．

（2）图中将细菌转到固体培养基上接种时，可采用的方法是______．初步筛选出来的菌种还需要进一步的鉴定：在培养基中加入______指示剂，接种并培养初步筛选的菌种，若指示剂变成______色，则可说明该菌种能够分解尿素．

（3）在实验中，下列材料或用具需要灭菌的是______，需要消毒的是______（填序号）．

①培养细菌的培养基与培养皿

②玻棒、试管、锥形瓶和吸管

③实验操作者的双手

（4）在进行分离分解尿素的细菌实验时，A同学从培养基上筛选出大约50个菌落，而其他同学只选择出大约20个菌落．A同学的实验结果产生的原因可能有______（填序号）．

①所取土样不同②培养基被污染③接种操作错误④没有设置对照实验

（5）实验结束后，使用过的培养基应该进行______处理后，才能倒掉．

Answer

该选择培养基中的唯一氮源是尿素 稀释涂布平板法 酚红 红 ①② ③ ①②③ 灭菌

【解析】

1、选择培养基是在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学物质，抑制不需要的微生物的生长，有利于所需微生物的生长。 
2、微生物常见的接种的方法： 
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。 
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。 
3、消毒和灭菌：

（1）该培养基中不加其它氮素，只以尿素作为唯一氮源，在此培养基上只有能够产生脲酶将尿素分解的细菌（目的菌）才能获得氮源，而不能分解尿素的细菌将因缺少氮源无法生长繁殖，故能从众多微生物中选出能分解尿素的目的菌。

（2）为进一步分离和纯化目的菌，还需进行稀释涂布平板法转入固体培养基，以便于获得单个菌落继续培养。分解尿素的细菌能合成脲酶，脲酶能将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强，因此在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素。 

（3）微生物培养实验中，需要对培养细菌用的培养基与培养皿，玻棒、试管、锥形瓶和吸管进行灭菌处理；对实验操作者的双手进行消毒。故需要灭菌的是①②，需要消毒的是③。

（4）该同学与其他同学获得的菌落数差异很大，原因分析如下：土样不同可能导致计数偏差；培养基污染会导致菌落数增加；操作失误可能增加微生物的数量和种类，菌落会增多；而没有设置对照不会增加菌落数目，故选①②③。  

（5）实验结束后，使用过的培养基进行灭菌处理后，才能倒掉，避免污染环境。