Question

梨树胶孢炭疽病是严重危害梨树的一种真菌病害，目前生产上侧重于用化学药剂进行防治，该方法对人类健康和生态环境都有危害。为改善这种状况，科研工作者对梨树胶孢炭疽病生物防治菌进行分离纯化，具体流程如下：

各种菌株的分离→炭疽病生物防治菌的筛选→炭疽病生物防治菌对病原菌抑菌活性的测定→最后确定的炭疽病生物防治菌为RT-30菌株

请回答：

（1）研究未知的微生物时，一定注意进行规范的无菌操作，以防研究者______。分离和筛选菌株的培养基为______，其原理是______。

（2）分离和筛选出来的菌株，要进行纯化处理，纯化处理的常用方法有______。纯化得到的菌株经培养会表现出稳定的菌落特征，菌落特征包括菌落的______。

（3）最后确定的炭疽病生物防治菌为RT-30菌株的理由是______。使用后的培养基在丢弃前需进行______。

Answer

被致病微生物感染 选择培养基 提供有利于目的菌株生长的条件，同时抑制或阻止其他微生物生长 平板划线法、稀释突变平板法 大小、形态、隆起程度和颜色 能够抑制炭疽病菌的生长繁殖；测定筛选的炭疽病生物防治菌对病原菌的抑制活性，RT-30菌株对病原菌的抑菌活性最大 灭菌处理

【解析】

1、无菌技术

（1）关键：防止外来杂菌的入侵。

（2）具体操作：①对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品接触。

（3）消毒和灭菌

消毒

灭菌

概念

使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包芽孢和孢子）

使用强烈的理化因素杀死物体内外所用的微生物（包括芽孢和孢子）

常用方法

煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法

灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌

适用对象

操作空间、某些液体、双手等

接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等

2、生物常见的接种的方法

①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。

②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

（1）研究未知的微生物时，一定注意进行规范的无菌操作，以防研究者被致病微生物感染。分离和筛选菌株的培养基为选择培养基，其原理是提供有利于目的菌株生长的条件，同时抑制或阻止其他微生物生长。

（2）纯化微生物的常用方法有平板划线法、稀释突变平板法。菌落特征包括菌落的大小、形态、隆起程度和颜色。

（3）最后确定的炭疽病生物防治菌为RT-30菌株的理由是：能够抑制炭疽病菌的生长繁殖；测定筛选的炭疽病生物防治菌对病原菌的抑制活性，RT-30菌株对病原菌的抑菌活性最大。使用后的培养基在丢弃前需进行灭菌处理，防止杂菌污染。