Question

研究表明，HER2/neu是一种原癌基因，它表达的H蛋白在多种恶性肿瘤特别是乳腺癌细胞中过量表达。抗H蛋白单克隆抗体能抑制过量表达H蛋白的乳腺癌细胞的生长，目前已成为有效的生物治疗手段。

(1)H蛋白在成年个体的正常组织中表达量____(填“低”或“高”)。H蛋白是一个跨膜蛋白，结构如图所示。制备免疫小鼠用的H蛋白(抗原)时，应构建_______区基因，转入受体细胞表达并提纯。

(2)为扩增出大量目的基因需用到PCR技术。常规PCR技术一般包括变性、退火、延伸等步骤，退火(55~60℃)时_________________碱基互补配对。设计引物是PCR技术的关键之一，某同学设计的两组引物如下表所示，其中引物对______(填“A”或“B”)设计不合理。

引物对A	P1  GTCCGCTAGTGGCTGTG P2  AGCTGGCGTTTAGCCTCG
引物对B	S1  AAGCCGGGCGCGCCCGGAA S2  TTCGGCCCGCGTTATGCGCG

(3)制备抗H蛋白单克隆抗体时，需将H蛋白注射到小鼠体内，这样做的目的是使小鼠体内产生_________。

(4)治疗乳腺癌时，可单独使用抗H蛋白单克隆抗体，也可以将______结合制成“生物导弹”，杀死癌细胞。

Answer

低 胞外 引物与模板DNA单链 B 分泌抗H蛋白抗体的B淋巴细胞(或浆细胞) 抗H蛋白单克隆抗体与药物(或细胞毒素)

【解析】

1、PCR扩增过程：①目的基因DNA受热（如95℃）变性后解链为单链；②温度降低时（如55℃），引物与单链相应互补序列结合；③当温度回升时（如72℃），在DNA聚合酶作用下进行延伸，形成互补的DNA双链。

2、单克隆抗体的制备过程

（1）向小鼠体内注射特定的抗原，使其发生免疫反应，使B淋巴细胞产生相应的抗体。

（2）利用仙台病毒或聚乙二醇等作介导，使B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合。

（3）经过筛选获得来自单一细胞的既能产生特异性抗体，又能无限增殖的杂交瘤细胞。

（4）将杂交瘤细胞在体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖，从细胞培养液或小鼠的腹水中提取。

（1）由题意可知，H蛋白在多种恶性肿瘤细胞中过量表达，因此H蛋白在成年个体的正常组织中表达量低。H蛋白为跨膜蛋白，包括胞外区、跨膜区和胞内区，其中胞外区可被免疫系统识别，故制备免疫小鼠H蛋白时，应构建胞外区基因。

（2）常规PCR技术一般包括变性、退火、延伸等步骤，退火（55～60℃）时，引物和模板DNA单链碱基互补配对，以便DNA子链延伸。引物B的S1、S2存在大量可以互补配对的碱基对，可能会发生自身碱基互补配对或者S1和S2部分发生碱基互补配对，而失去与模板链结合的机会，因此其设计不合理。

（3）制备抗H蛋白单克隆抗体时，H蛋白为抗原，将H蛋白注射到小鼠体内，会发生特异性免疫反应，产生特异性的浆细胞，进而产生抗H蛋白的抗体。

（4）治疗乳腺癌时，可单独使用抗H蛋白单克隆抗体，通过抗原抗体结合，最终清除癌细胞，也可以将抗H蛋白单克隆抗体和抗癌药物结合制成“生物导弹”，双重作用杀死癌细胞。