Question

如图为构建某重组质粒的过程示意图．lacZ 基因可使细菌利用加入培养基的物质 X﹣gal，从而使菌落显现出蓝色，若无该基因，菌落则成白色．图中甲﹣﹣戊 DNA 片段只注 明了黏性末端处的碱基种类，其它碱基的种类未作注明．

（1）若酶 M 特异性识别的 DNA 碱基序列是，则酶 N 特异性识别的 DNA 碱基序列是______________________。

（2）过程②是将所有片段混合在一起，用___________酶拼接可得到不同的重组 DNA．

（3）如果只考虑 2 个片段的组合，那么甲、乙、丁三个片段中能够形成环状 DNA 的片段组合 是_____。

A．甲和乙  B．甲和甲    C．甲和丁    D．乙和乙    E．乙和丁     F．丁和丁

（4）为了筛选含重组质粒的受体菌，应在培养基中额外加入______________培养 一段时间，挑选出___________色的菌落进一步培养．原来质粒中，限制酶 M 和 N 的酶切位点 应该位于___________。

A．M 位于青霉素抗性基因中，N 位于 lacZ 基因中

B．N 位于青霉素抗性基因中，M 位于 lacZ 基因中

C．M 和 N 都位于青霉素抗性基因中

D．M 和 N 都位于 lacZ 基因中

（5）上述目的基因能够在受体细菌中表达，其原因是不同生物______________________。

Answer

DNA连接酶 ABCDEF 青霉素和X-gal 白 D 共用一套遗传密码

【解析】

1、切割DNA的工具是限制性核酸内切酶，又称限制酶，限制酶是基因工程必需的工具酶，其特性是一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列。

2、DNA连接酶可以恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键，使两个DNA分子片段连接成一个DNA。常用的DNA连接酶有：E·coli DNA连接酶：来源于大肠杆菌，连接黏性末端；T4DNA连接酶：来源于T4噬菌体，连接黏性末端和平末端(效率较低)。

（1）质粒经过酶M和酶N的切割形成甲、乙片段，根据甲、乙片段的黏性末端可知，两种限制酶的识别序列分布是、，酶M特异性识别的DNA碱基序列是，则酶N特异性识别的DNA碱基序列是。由以上分析可知，酶N特异性识别的DNA碱基序列是。

（2）DNA连接酶可以将具有相同黏性末端的DNA片段连接起来．
（3）甲、乙、丁都有两个黏性末端，且都相同，因此如果只考虑2个片段的组合，那么甲、乙、丁三个片段中任意两个连接都能够连接形成环状DNA。

（4）根据题干信息，“lacZ 基因可使细菌利用加入培养基的物质 X﹣gal，从而使菌落显现出蓝色，若无该基因，菌落则成白色，这表明青霉素抗性基因没有被破坏”可知：为了筛选含重组质粒的受体菌，应在通用培养基中额外加入青霉素和X-gal，培养一段时间，挑选出白色的菌落进一步培养。lacZ基因已经被破坏，因此在原来质粒中，限制酶M和N的酶切位点都位于lacZ基因中。

（5）目的基因能够在受体细菌中表达，原因是不同生物共用一套密码子。