Question

下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tet^R表示四环素抗性基因，amp^R表示氨苄青霉素抗性基因，BamHⅠ、Hind Ⅲ、SmaⅠ直线所示为三种限制酶的酶切位点。据图回答下面的问题。

（1）图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用____________（填限制酶的名称）限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因；连接酶切产物要用到DNA连接酶，按其来源不同，可分为两类，即________DNA连接酶和________DNA连接酶。

（2）理论上讲，构建载体时的连接产物可能有____________、____________、____________三种。

（3）筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含________的培养基上进行。

（4）能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是_______。

A．启动子            B．tet^R         C．复制原点         D．amp^R

Answer

HindIII和BamHI E·coli T4 目的基因—目的基因 载体—载体 目的基因—载体 氨苄青霉素 A

【解析】试题分析：本题以培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器为背景，综合考查了基因工程的原理的知识。通过（1）提取图示载体和人乳铁蛋白基因结构图信息，从而判断出需选择的限制酶种类；通过（3）重组载体上含有的氨苄青霉素基因，从而确定培养基上所含有的抗生素种类；其余问题比较简单，只需按照课本知识进行解答即可。

（1）由图可知，质粒的启动子下游有HindIII和BamHI两种限制酶的切割位点，人乳铁蛋白基因的两端也存在这两种限制酶的切割位点，所以将人乳铁蛋白基因插入载体，需用HindIII和BamHI两种限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因；DNA连接酶按其来源不同，可分为两类，即E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶。

（2）由于HindIII和BamHI两种限制酶切割目的基因与载体后形成的黏性末端可以互相连接，所以理论上讲，构建载体时的连接产物可能有目的基因—目的基因、载体—载体和目的基因—载体三种。

（3）由于重组载体上具有ampR（氨苄青霉素抗性基因），因此首先需要在含氨苄青霉素的培养基上筛选含有重组载体的大肠杆菌，在该培养基上，含有重组载体的大肠杆菌能够生存，而不含重组载体的大肠杆菌则会死亡。

（4）能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是乳腺蛋白基因的启动子。